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Laboratorio 4: Microscopía - Biología

Laboratorio 4: Microscopía - Biología


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(Adaptado de http://www.biologycorner.com/)

Introducción:

Un microscopio es un instrumento que amplía un objeto para que el observador pueda verlo. Debido a que las células suelen ser demasiado pequeñas para verlas a simple vista, un microscopio es una herramienta esencial en el campo de la biología. Además de la ampliación, los microscopios también proporcionan resolución, que es la capacidad de distinguir dos objetos cercanos como separados. Es necesaria una combinación de aumento y resolución para ver claramente las muestras bajo el microscopio. El microscopio óptico dobla un haz de luz hacia la muestra utilizando una serie de lentes para proporcionar una imagen clara de la muestra al observador.

En este laboratorio, se revisarán partes del microscopio. Los estudiantes aprenderán el uso y cuidado adecuados del microscopio y observarán muestras del agua del estanque.

Partes del microscopio:

Aumento:

Su microscopio tiene 4 lentes de objetivo: escaneo (4x), bajo (10x), alto (40x) e inmersión en aceite (100x). En este laboratorio, no utilizará la lente de inmersión en aceite; es para ver microorganismos y requiere instrucciones técnicas que no se cubren en este procedimiento.

Además de las lentes del objetivo, la lente ocular (ocular) tiene un aumento. El aumento total se determina multiplicando el aumento de los lentes ocular y objetivo.

AumentoLentes ocularesAmpliación total
Exploración4x10 veces40x
Baja potencia10 veces10 veces100 veces
Alto Voltaje40x10 veces400x
Inmersión en aceite100 veces10 veces1000x

Procedimientos generales:

1. Asegúrese de que todas las mochilas, carteras, etc. estén fuera de la mesa.

2. Lleve el microscopio por la base y el brazo con ambas manos.

3. Guarde con el cable enrollado alrededor del microscopio y el objetivo de escaneo encajado en su lugar.

Especímenes de enfoque:

1. Conecte su microscopio a la fuente de alimentación y encienda el iluminador.

2. Comience siempre con el escenario lo más bajo posible y utilizando el objetivo de escaneo (4x). Lo más probable es que pueda ver algo en esta configuración (a veces es solo un color). Use la perilla gruesa para enfocar: la imagen puede ser pequeña con este aumento, pero no podrá encontrarla en las potencias más altas sin este primer paso. Mueva la platina mecánica hasta que su imagen enfocada también esté centrada.

3. Una vez que haya enfocado usando el objetivo de escaneo, cambie al objetivo de baja potencia (10x). Utilice la perilla gruesa para volver a enfocar y mueva la platina mecánica para volver a centrar su imagen. Nuevamente, si no se ha concentrado en este nivel, no podrá pasar al siguiente nivel.

4. Ahora cambie al objetivo de alta potencia (40x). En este punto, utilice ÚNICAMENTE la perilla de ajuste fino para enfocar las muestras.

5. Si la muestra es demasiado clara o demasiado oscura, intente ajustar el diafragma.

Limpiar:

1. Guarde el microscopio con el objetivo de escaneo en su lugar y la platina en su posición más baja.

2. Envuelva cables alrededor del microscopio.

3. Vuelva a colocar las diapositivas en la bandeja de diapositivas original.

Solución de problemas:

De vez en cuando puede tener problemas para trabajar con su microscopio. A continuación, se muestran algunos problemas y soluciones comunes.

1. ¡La imagen es demasiado oscura!

  • Ajuste el diafragma, asegúrese de que la luz esté encendida.

2. Hay un punto en mi campo de visión, ¡incluso cuando muevo la diapositiva, el punto permanece en el mismo lugar!

  • Tu lente está sucia. Utilice papel para lentes y solo papel para lentes para limpiar con cuidado el objetivo y la lente ocular. La lente ocular se puede quitar para limpiar el interior.

3. ¡No puedo ver nada a alta potencia!

  • Recuerde los pasos, si no puede enfocar en el escaneo y luego en baja potencia, no podrá enfocar nada en alta potencia.

4. Solo la mitad de mi campo de visión está iluminado, ¡parece que hay una media luna allí!

  • Probablemente no tenga su objetivo completamente encajado en su lugar.

5. ¡Veo mis pestañas!

  • Estás demasiado cerca de los objetivos. Mueva la cabeza un poco hacia atrás.

6. ¡Esto me está dando dolor de cabeza!

  • Relajarse. Intente ajustar la distancia ocular, verifique que la intensidad de su luz no sea demasiado alta ni demasiado baja. ¡Tómese descansos si es necesario!

Nota

Sea paciente y siga intentándolo. ¡Usar un microscopio requiere práctica!

Parte 1: Orientación de las imágenes en el microscopio

Una gran parte del proceso de aprendizaje de la microscopía consiste en acostumbrarse a la orientación de las imágenes vistas a través de los oculares en lugar de a simple vista. Un error común es mover la platina mecánica en sentido contrario para encontrar la muestra. Este procedimiento es simplemente una práctica diseñada para hacer que los nuevos usuarios se sientan más cómodos con el uso del microscopio.

Materiales:

  • Microscopio compuesto
  • Portaobjetos de microscopio con la letra "e"

Procedimiento:

1. Coloque la diapositiva de la letra “e” en la platina mecánica. Asegúrese de observar la orientación de la letra "e" tal como aparece a simple vista.

2. Utilice el objetivo de ESCANEO (4x) y el ajuste del enfoque del rumbo para enfocar, luego mueva la platina mecánica para encontrar la letra “e”. Tenga en cuenta la orientación cuando se ve a través de los oculares.

¿La lente del microscopio invierte la imagen? _________

¿Da la vuelta a la imagen? (al revés) _________

Parte 2: Práctica con profundidad de campo en el microscopio

Esta parte del procedimiento es otra práctica para demostrar la percepción de profundidad. A muchos usuarios nuevos de microscopios les resulta difícil concebir que la muestra del portaobjetos tenga tres dimensiones. A medida que el escenario se mueve hacia arriba y hacia abajo, se enfocarán diferentes hilos.

Materiales:

  • Microscopio compuesto
  • Portaobjetos de microscopio con 3 hilos

Procedimiento:

1. Coloque el deslizador del hilo en la platina mecánica.

2. Utilice el objetivo de ESCANEADO (4x) y el ajuste del enfoque del rumbo para enfocar, luego mueva la platina mecánica para encontrar los hilos.

3. Si es necesario, cambie al objetivo de baja potencia (10x) y vuelva a enfocar.

4. Determine qué hilo está en la parte inferior, media y superior de la diapositiva.

Parte 3: Investigación del agua de los estanques y los microorganismos

Materiales:

  • Microscopio compuesto
  • Portaobjetos de microscopio
  • Cubreobjetos
  • Pipeta de transferencia
  • Muestra de agua de estanque

Procedimiento:

1. Con la pipeta de transferencia, transfiera una gota de agua del estanque a un portaobjetos de microscopio. Los mejores especímenes generalmente provienen del fondo y probablemente contendrán trozos de algas u otros desechos que pueda ver a simple vista.

2. Coloque el cubreobjetos sobre el portaobjetos.

3. Utilice el objetivo ESCANEADO (4x) para enfocar, luego mueva la platina mecánica para escanear el portaobjetos en busca de microorganismos vivos. Está buscando seres diminutos que nadan; pueden verse verdes o claros y pueden ser muy pequeños. Elija uno en el que enfocarse y céntrelo en su campo visual.

Nota

¡Es posible que desee utilizar ProtoSlo para evitar que sus organismos naden demasiado rápido!

4. Cambie a baja potencia (10x). Esto puede ser suficiente para ver su organismo elegido. Trate de notar cómo se mueve y haga todo lo posible para dibujarlo como lo ve, a menos que necesite más aumento.

5. Una vez que haya centrado y enfocado la imagen, cambie a alta potencia (40x) y vuelva a enfocar. Note los movimientos y dibuje el organismo como lo ve.

Nota

Recuerde, NO use la perilla de ajuste grueso en este punto.

Preguntas:

1. ¿Por qué es importante comenzar a enfocar con el objetivo de escaneo?

2. Si está utilizando el objetivo de 40x y sabe que su ocular es de 10x, ¿cuál es el aumento total?

3. Si golpea su microscopio y pierde el enfoque, ¿qué hace para volver a enfocar su muestra?

4. ¿Por qué debe centrar su imagen antes de cambiar a un objetivo más alto?


El microscopio óptico compuesto es, con mucho, el equipo más utilizado en la caja de herramientas del biólogo. Si bien los orígenes son inciertos, en 1644 se utilizaron versiones primitivas de este microscopio para visualizar el interior del tejido vivo. Durante las siguientes décadas, la producción de microscopios ópticos mejoró enormemente y comenzó a tener un gran impacto en nuestra comprensión del mundo natural. De Robert Hooke Micrografía , aunque no es la primera publicación que ilustra este nuevo conocimiento, tuvo un gran impacto, en parte debido a sus impresionantes ilustraciones que muestran inmaculados detalles de pequeños insectos, como la pulga y la hormiga. Quizás el mayor avance resultante de las primeras investigaciones que utilizaron el microscopio fue el descubrimiento de microorganismos del que informó por primera vez Antonie van Leeuwenhoek en 1676.

Un microscopio óptico compuesto utiliza varios espejos para enfocar una fuente de luz sobre la muestra. Si bien estos microscopios pueden ser muy simples, la mayoría de los biólogos usan microscopios especializados con características que les permiten controlar la resolución y el contraste manipulando los espejos, la intensidad de la luz y la apertura del condensador.

Configurar el microscopio

  1. Limpie todas las lentes del microscopio con papel para lentes y limpiador de lentes.
  2. Abra el brazo del soporte de diapositivas y coloque la diapositiva de forma segura en él.
  3. Enciende la luz. Determina dónde está el control de intensidad de la luz. Gírelo hacia arriba y hacia abajo mirando a través de las lentes oculares.
  4. Ubique las lentes del objetivo en el revólver portaobjetivos. Apunte el objetivo más bajo (generalmente 4x) hacia la muestra. 4x se conoce como objetivo de escaneo. Es el objetivo que usamos para mirar muestras más grandes bajo el microscopio, o para localizar regiones de interés antes de cambiar a un objetivo más alto.

Visualizando la muestra

  1. Con el objetivo de escaneo en su lugar, centre la muestra directamente debajo de él. En este punto, la etapa debería estar completamente hacia abajo.
  2. Mientras mira a través de las lentes oculares, utilice el ajuste de enfoque aproximado para elevar la platina del microscopio hasta que la muestra entre y desenfoque. Continúe ajustando hasta que la muestra esté clara. Si necesita ayuda, asegúrese de preguntarle a su instructor.
  3. Una vez que su muestra esté claramente enfocada, ubique el control de intensidad de la luz y cambie la intensidad de la luz de baja a alta.
  4. Gire el revólver portaobjetivos hacia el objetivo de baja potencia (10x). Los microscopios compuestos modernos son confocal lo que significa que mantienen el enfoque de un objetivo a otro. En este punto, utilice la perilla de enfoque grueso (y la perilla de enfoque fino) para enfocar la muestra.
  5. Una vez que la muestra esté enfocada a baja potencia, gire el revólver portaobjetivos ajustando el objetivo de alta potencia (40x). Mire la distancia entre la lente del objetivo y el portaobjetos del microscopio. UTILICE ÚNICAMENTE LA PERILLA DE AJUSTE FINO PARA ENFOCAR LAS MUESTRAS EN POTENCIAS ALTAS Y DE INMERSIÓN EN ACEITE.
  6. La visualización adecuada de las muestras requiere condiciones de iluminación específicas. Mientras su muestra está enfocada a alta potencia, mueva la palanca de apertura del condensador de izquierda a derecha.

A continuación, observará su muestra con el objetivo de inmersión en aceite. Como su nombre lo indica, sumergirá la lente del objetivo en aceite. El aumento total del objetivo de inmersión en aceite es 1000x. Con este aumento, las ondas de luz se refractan de tal manera que la resolución de la imagen se distorsiona. El aceite de inmersión es un líquido transparente con un alto índice de refracción, que permite que la luz pase directamente a la lente del objetivo, mejorando la resolución. NO USE EL AJUSTE GRUESO CON EL OBJETIVO DE INMERSIÓN DE ACEITE. UTILICE ÚNICAMENTE EL OBJETIVO FINO, PORQUE PUEDE ROMPER LA LENTE.

Principio de microscopía de inmersión. Con un poder de aumento alto, las ondas de luz se refractan del vidrio en el portaobjetos del microscopio y la cubierta deslizante. El aceite de inmersión tiene un alto índice de refracción, lo que minimiza esta refracción permitiendo que la luz ingrese al objetivo en línea recta. Esto aumenta la resolución de la muestra.


4.1 Montaje húmedo de hoja de Elodea

Elodea canadensis (Alga acuática americana o canadiense o alga de estanque) es una planta acuática perenne, o macrófita sumergida, nativa de la mayor parte de América del Norte. Crece rápidamente en condiciones favorables y puede ahogar estanques, canales y márgenes de algunos ríos de corriente lenta. Requiere temperaturas de agua en verano de 10-25 ° C e iluminación de moderada a brillante. Las plantas jóvenes comienzan inicialmente con un tallo de plántula con raíces que crecen en el lodo en el fondo del agua y se producen más raíces adventicias a intervalos a lo largo del tallo, que pueden colgar libremente en el agua o anclarse en el fondo. Crece indefinidamente en las puntas de los tallos y los especímenes individuales pueden alcanzar longitudes de 3 mo más. Las hojas son de color verde brillante, translúcidas, oblongas, de 6-17 mm de largo y 1-4 mm de ancho, nacidas en verticilos de tres (raramente dos o cuatro) alrededor del tallo. Vive completamente bajo el agua, con la única excepción de las pequeñas flores blancas o violetas pálidas que flotan en la superficie y están unidas a la planta por delicados tallos. Es dioica, con flores masculinas y femeninas en diferentes plantas. Las flores tienen tres pequeños pétalos blancos, las flores masculinas tienen pétalos de 4.5-5 mm y nueve estambres, las flores femeninas tienen pétalos de 2-3 mm y tres carpelos fusionados. El fruto es una cápsula ovoide de unos 6 mm de largo que contiene varias semillas que maduran bajo el agua. Las semillas son de 4-5 mm de largo, fusiformes, glabras (redondas) y estrechamente cilíndricas. Florece de mayo a octubre.

4.1.1 Procedimientos experimentales

  1. Coge una sola hoja de la planta Elodea y móntela en un tobogán, cúbrela con una gota de agua y un cubreobjetos.
  2. Coloque el portaobjetos en el estado del microscopio y observe la hoja bajo el microscopio.
  3. Estas hojas tienen dos células de grosor, por lo que debería poder enfocar hacia arriba y hacia abajo para ver que las células de una capa son más grandes que las de la otra. Cuando una capa está enfocada, es posible que pueda ver los contornos sombreados de las paredes de las celdas en la otra capa.
  4. Observe que las células están claramente delimitadas por la pared celular.
  5. Dentro de las células hay grandes cuerpos verdes de forma ovalada, los cloroplastos.
  6. A medida que las células se calientan, puede ver los cloroplastos transportados por el citoplasma en movimiento alrededor del núcleo casi transparente en el centro de la célula.
  7. Haz un dibujo de lo que ves con un aumento de 400 ×.

Figura 4.6: Montaje húmedo de la hoja de Elodea (objetivo 4 ×).

Ahora, mire el siguiente video y vea cómo se compara con lo que acaba de leer:


Ver el vídeo: BIOLOGÍA Y LABORATORIO - 4 CÉLULA (Junio 2022).