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¿Por qué el acortamiento de los telómeros ralentiza el cáncer?

¿Por qué el acortamiento de los telómeros ralentiza el cáncer?


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Estoy leyendo el alargamiento alternativo de los telómeros en células de mamíferos, sobre cómo los telómeros se relacionan con los cánceres humanos.

Debido al problema de la replicación final, 5,6 los extremos de los cromosomas lineales se acortan con cada ronda de replicación del ADN.7 En las células somáticas humanas, el acortamiento progresivo de los telómeros que ocurre con la proliferación continua eventualmente da como resultado el desencadenamiento de un punto de control replicativo. El acortamiento de los telómeros y los cambios estructurales que presumiblemente causa, conduce a una respuesta de punto de control de daño del ADN en el telómero y a la inducción de una detención permanente del crecimiento dependiente de p53 y Rb (es decir, senescencia replicativa) .8-10 Porque esto limita la proliferación La capacidad de las células somáticas, incluidas las que han acumulado mutaciones oncogénicas, el acortamiento de los telómeros y la senescencia replicativa son un potente mecanismo supresor de tumores.

El párrafo establece que un telómero más corto es un supresor potencial de cánceres. ¿Porqué es eso? ¿Por qué exactamente una célula somática prolifera más lentamente con una secuencia de ADN de telómero más corta?

Por el contrario, ¿por qué una minoría más larga conduce a cánceres humanos?


Piense en los 24 cromosomas lineales diferentes en una célula XY humana diploide. En ausencia de la enzima telomerasa activa para reparar los extremos del cromosoma después de una ronda de división celular, cada vez que la célula se divide, cada extremo de cada cromosoma se acorta un poco.

Si la célula se sigue dividiendo indefinidamente, como una célula tumoral, los cromosomas efectivamente se están reduciendo. Con el tiempo, este acortamiento cromosómico dará como resultado la eliminación de genes reales (al principio, 24 cromosomas x 2 extremos de cromosomas = 48 genes). No todos esos genes son esenciales para la viabilidad celular; y la distancia, o longitud, del ADN entre el telómero y el primer gen en ese extremo será variable. Pero tan pronto como el acortamiento de los cromosomas elimina parte de un gen esencial, esa célula morirá rápidamente.

Sería como borrar las palabras en ambos extremos de una oración, una letra a la vez. Al principio, alguien más podría encontrarle sentido a tu oración, pero eventualmente no podría entender completamente qué información estabas tratando de transmitir.

La mayoría de las células diferenciadas terminalmente en un ser humano adulto ya no se dividen activamente, por lo que no es un problema, no necesitan telomerasa activa. Sin embargo, el cáncer es una condición de división celular no regulada, por lo que todas las células cancerosas deben tener algún mecanismo para reparar los extremos de sus cromosomas. Reactivación de TERT (Transcriptasa inversa de telomerasa, el componente proteico de la enzima telomerasa) La expresión del gen es extremadamente común en las células cancerosas.


Telómeros TZAP-ing reducidos al tamaño

El fenómeno del acortamiento gradual de los telómeros se ha convertido en un paradigma de cómo entendemos la biología del envejecimiento y el cáncer. La proliferación celular va acompañada de una pérdida acumulativa de telómeros y la célula envejecida envejece, muere o se transforma en cáncer. Esta transformación requiere la activación de los mecanismos de elongación de los telómeros para restaurar la longitud de los telómeros de manera que no se induzcan programas de senescencia o muerte celular. La mayoría de las veces, esto ocurre a través de la reactivación de la telomerasa. En otros casos raros, la vía del alargamiento alternativo de los telómeros (ALT) secuestra los mecanismos asociados a la recombinación del ADN para hiperextender los telómeros, a menudo a más de 50 kb. Por qué la longitud de los telómeros está restringida y qué establece su longitud máxima ha sido un enigma de larga data en la biología celular. Dos estudios recientes publicados en este número de Informes EMBO [1] y recientemente en Ciencias [2] trató de abordar esta importante cuestión. Ambos se basaron en enfoques ómicos que identificaron a ZBTB48 como una posible proteína asociada a los telómeros y revelan que es un regulador crítico de la homeostasis de la longitud de los telómeros mediante el mecanismo de recorte de los telómeros. Estos descubrimientos brindan información fundamental para nuestra comprensión del recorte de los telómeros y cómo afecta la integridad de los telómeros en las células madre y cancerosas.


El mismo predictor de esperanza de vida se comparte entre humanos y animales

Medido en criaturas como elefantes, cabras y humanos, una métrica muestra cuánto tiempo vivirá una especie.

Cuando se trata de vender aceite de serpiente, nadie lo hace como la industria antienvejecimiento. Pero hace una cosa bien. Los telómeros, las diminutas tapas terminales de nuestros cromosomas, parecen proteger contra las enfermedades relacionadas con el envejecimiento, y los investigadores antienvejecimiento sospechan que ralentizar la rapidez con la que se encogen los telómeros puede ralentizar el proceso de envejecimiento. Nueva investigación publicada el lunes en el procedimientos de la Academia Nacional de Ciencias confirma esta conexión entre especies animales.

Nadie ha logrado alargar los telómeros o ralentizar su encogimiento, pero estudios previos en ratones y humanos han demostrado que el acortamiento de los telómeros está relacionado con el envejecimiento. El nuevo artículo muestra que este efecto es válido para una amplia variedad de especies animales, incluidas aves y mamíferos.

El equipo de autores españoles demostró que la tasa de acortamiento de los telómeros en ocho animales diferentes predijo claramente la esperanza de vida media de los animales. Demostraron que los animales más longevos tenían telómeros que tardaban más en acortarse.

"Los resultados que se muestran aquí indican que la tasa de acortamiento de los telómeros de una especie se puede utilizar para predecir la duración de la vida de esa especie, al menos con el conjunto de datos actual", escriben los autores del estudio, dirigido por Kurt Whittemore, Ph.D., un investigador del Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas de España.

Cada vez que nuestras células se dividen, los telómeros que protegen el ADN en sus núcleos se acortan. Una vez que se vuelven demasiado cortos, ya no pueden evitar que los cromosomas se deshagan. Esto significa que con el tiempo, a medida que los telómeros se acortan, las células corren un mayor riesgo de daño y muerte. Por esta razón, algunas terapias antienvejecimiento, como el enfoque no probado de la controvertida empresa de biotecnología BioViva, tienen como objetivo alargar los telómeros.

Pero como el PNAS Según muestra el estudio, la longitud absoluta puede no ser tan importante como la tasa de acortamiento.

En el estudio, independientemente de la longitud de los telómeros de los animales, fue la velocidad a la que se acortaron la que se correlacionó estrechamente con la duración de su vida útil.

“Observamos que la longitud media de los telómeros al nacer no se correlaciona con la esperanza de vida de las especies, ya que muchas especies de vida corta tenían telómeros muy largos y las especies de vida larga tenían telómeros muy cortos”, escriben los autores.

El equipo utilizó una técnica de fluorescencia para medir la longitud de los telómeros en células de un grupo de animales muy diferentes: ratón de laboratorio (Mus musculus), cabra (Capra hircus), Gaviota de Audouin (Larus audouinii), reno (Rangifer tarandus), buitre leonado (Gyps fulvus), delfín nariz de botella (Tursiops truncatus), Flamenco americano (Phoenicopterus ruber) y elefante de Sumatra (Elephas maximus sumatranus).

Para crear un modelo lineal de cómo los telómeros se acortan con el tiempo, el equipo midió muestras de animales de diferentes edades de la misma especie. Al comparar estas longitudes de telómeros, el equipo pudo tener una idea de cómo se comparan las longitudes de los telómeros de un individuo mayor con las de uno más joven.

Observaron que el ratón, el animal de vida más corta del estudio, tiene una tasa de reducción de los telómeros extraordinariamente rápida, unas 100 veces la de un humano. Las tasas de acortamiento de los telómeros de los otros animales cayeron en algún lugar entre las de los ratones y los humanos, y todas ellas se correlacionaron con su esperanza de vida promedio.

Los autores admiten que los estudios futuros sobre este tema deberían incluir un diseño longitudinal, que seguiría a animales o humanos a lo largo de toda su vida. Dado que algunos de los animales del estudio tienen una vida útil muy larga, no habría sido posible hacerlo en el estudio actual.

Este estudio apoya la idea de que los efectos del acortamiento de los telómeros están estrechamente relacionados con la muerte celular y el daño asociado con las enfermedades relacionadas con el envejecimiento. Aunque los investigadores antienvejecimiento no han logrado extender la esperanza de vida de los seres humanos, esta hipótesis en particular sugiere que al menos pueden estar buscando en el lugar correcto.

Pero hasta ahora, los mejores investigadores en el campo no han podido frenar el acortamiento de los telómeros, a pesar de que algunos han sugerido que el ejercicio puede hacer el truco.

"No tenemos ningún compuesto que realmente alargue los telómeros, a pesar de lo que se puede leer en muchos sitios web", dijo previamente la Premio Nobel Carol Greider, Ph.D. Inverso.

“Por supuesto, debido a que tenemos pacientes en el hospital que mueren a causa de estas enfermedades, si hubiera algún tipo de tratamiento, lo estaríamos investigando. Pero hemos investigado esas cosas que están ahí fuera, y es básicamente aceite de serpiente ".


Decodificación de la biología de los telómeros y el riesgo de cáncer

Sharon salvaje lidera un equipo para desentrañar los secretos de nuestros telómeros.

La Dra. Sharon Savage con Nancy, participante en un estudio del Centro Clínico de los NIH sobre disqueratosis congénita, antes de un procedimiento de aspiración y biopsia de médula ósea.

Los cromosomas tienen poco en común con los cordones de los zapatos o las bombas, pero los telómeros (los tramos repetidos de ADN que cubren los extremos de los cromosomas) a menudo se comparan con los componentes de ambos.

A medida que las puntas de plástico (herretes) protegen los cordones de los zapatos para que no se deshilachen y los fusibles de las bombas se queman hasta un peligro inminente, los telómeros mantienen la estabilidad cromosómica y protegen nuestros datos genéticos, y cuando se desgastan por el envejecimiento o las tensiones ambientales, el ADN se vuelve vulnerable a la degradación. Cada vez que una célula se divide, un proceso asociado con el envejecimiento normal, sus telómeros se acortan, hasta que la célula sufre apoptosis (muerte celular programada) o senescencia (la célula permanece viva, pero inactiva).

Las reuniones de equipo alimentan una variedad de proyectos de investigación con nuevas ideas.

Sharon Savage, M.D., ha dedicado su carrera a estudiar la asociación entre la longitud de los telómeros y el riesgo de cáncer, mientras busca marcadores genéticos que predicen los trastornos de la biología de los telómeros. Gran parte de su trabajo se centra en la disqueratosis congénita (DC), un síndrome de predisposición al cáncer hereditario raro y complejo.

"Aunque es extremadamente raro", explica el Dr. Savage, "debido a su asociación con el cáncer y su vínculo establecido con los genes de la biología de los telómeros, una mejor comprensión de la CD podría tener implicaciones de gran alcance para comprender el riesgo y la etiología del cáncer de manera más amplia".

Las células humanas contienen 46 cromosomas (azules), cuyos extremos están cubiertos con telómeros protectores (blancos) que varían en longitud.

Cuando Savage se unió a la División de Genética Clínica del IRP, las mutaciones en tres genes:DKC1, TERT, y TERC—Representaron aproximadamente el 40% de los casos de CD. El 60% restante de los pacientes con DC todavía carecía de una fuente genética identificable de la enfermedad. Trabajando como parte del estudio de cohorte de síndromes de médula ósea heredados (IBMFS), en el Instituto Nacional del Cáncer de los NIH, el equipo de Savage ha identificado cuatro genes adicionales con mutaciones asociadas con el mantenimiento de los telómeros que pueden causar DC.

Variación en un gen llamado TINF2 fue su primer gran descubrimiento. En colaboración con investigadores de la Universidad de Stanford, el equipo mostró a continuación que la recesión WRAP53 las mutaciones pueden causar DC, el primer estudio que muestra que la ubicación anormal de la telomerasa, la proteína que sintetiza el ADN se repite en los extremos de los telómeros, en la célula está asociada con DC. Más recientemente, su equipo descubrió mutaciones en una helicasa de ADN y un gen de mantenimiento de telómeros llamado RTEL1 en varias familias, incluidas dos de ascendencia judía asquenazí, una variante clínicamente grave de DC conocida como síndrome de Hoyeraal-Hreidarsson (HH).

Los dermatólogos Dominique Pichard (izquierda) y Edward Cowen (centro) examinan la piel y las uñas de Charlie, el hijo de Nancy, dos áreas del cuerpo frecuentemente afectadas por DC y otros trastornos biológicos de los telómeros.

“Desde aquí colaboramos con el Centro de Genética Judía para definir la frecuencia de RTEL1 mutaciones en esta población y demostró que son lo suficientemente comunes como para agregarse al panel de pruebas prenatales para esta población ”, dice Savage. “Esta historia ejemplifica por qué el estudio de las enfermedades raras es tan importante. Nuestro RTEL1 los descubrimientos no habrían sucedido en otras circunstancias, y los hallazgos ahora se aplicarán para ayudar a los asquenazíes y otras poblaciones judías ortodoxas a manejar los riesgos potenciales asociados con esta grave enfermedad ".

El tratamiento para la DC es un desafío y las opciones actuales son limitadas, por lo que Savage y Suneet Agarwal, MD, oncólogo pediátrico del Dana-Farber Cancer Institute y del Boston Children's Hospital, formaron el Clinical Care Consortium of Telomere Associated Ailments (CCCTAA) para identificar nuevas enfermedades. tratamientos y mejorar los resultados. Primero en su lista está la necesidad urgente de desarrollar estrategias para inscribir a un mayor número de pacientes con CD en ensayos clínicos.

Su oficina puede ser un buen lugar para encontrar al Dr. Savage y conversar sobre nuevas ideas.

Paralelamente, Savage está trabajando con DC Outreach, un grupo de apoyo para familias afectadas que ella ayudó a lanzar, para desarrollar las primeras pautas clínicas para el manejo de la enfermedad. También ayuda a DC Outreach en su colaboración con Genetic Alliance para crear una base de datos de pacientes de DC. Gracias a Savage y otros, ahora hay al menos 13 genes de DC conocidos, todos ellos relacionados con la biología de los telómeros.

La Dra. Savage ha dedicado su carrera a pensar en formas de ayudar a las personas con trastornos de la biología de los telómeros.

"Este trabajo no sería posible en ningún otro lugar", explica Savage. “En primer lugar, los estudios de familias numerosas como el nuestro son importantes porque brindan información sobre los cánceres más comunes, pero requieren colaboraciones de investigación interdisciplinarias. En segundo lugar, debido a las variadas manifestaciones clínicas de la CD, nuestros pacientes necesitan acceso a una amplia gama de especialistas. El programa de investigación intramuros combina estos elementos únicos, lo que nos permite llevar a cabo proyectos de alto riesgo y de ritmo rápido con acceso a una amplitud y profundidad incomparables de experiencia ".

Dichos atributos permitieron a la Dra. Savage y su equipo crear un programa de genética clínica traslacional dedicado enteramente a la compleja "desactivación" de los telómeros que se acortan rápidamente. Cada día, y cada paciente que visita la clínica, los acerca a identificar formas de ralentizar o interrumpir ese proceso.


Resultados y discusión

La chelidonina exhibió citotoxicidad dependiente de la dosis

Se utilizó el método MTT para evaluar la citotoxicidad de la quelidonina en células MCF7. El LD50 El valor fue de 8 μM después de 48 h de tratamiento (p≤0.05). La chelidonina mostró una fuerte citotoxicidad, reduciendo rápidamente el número de células viables a bajas concentraciones (Fig. 1). Sin embargo, esta pendiente pronunciada en la curva de respuesta a la dosis se moderó posteriormente de modo que el 20-30% de las células aún eran viables a 50 µM. Se observó una muerte celular completa a 100 µM. En los siguientes experimentos se utilizaron concentraciones muy bajas: 0.01 y 0.05 μM, en tratamientos a largo plazo. En los estudios de longitud de los telómeros, también se incluyó el tratamiento con quelidonina 0,1 µM.

La quelidonina aumentó el tiempo de duplicación de la población

Las células MCF7 se trataron con quelidonina 0,01 o 0,05 µM durante 48 h después de cada pase. La chelidonina a 0.01 μM no cambió la duplicación de la población y el tiempo de duplicación de las células MCF7 no se observó significativamente ningún cambio morfológico hacia la senescencia o alteración de las tasas de crecimiento incluso después de tratamientos continuos de cultivos en fase logarítmica durante casi 1080 h (Fig.2, diamantes). Sin embargo, se produjo una reducción significativa de la tasa de crecimiento en las células tratadas con quelidonina 0,05 μM en comparación con el control no tratado (pag & lt 0,005) que se ve claramente después de cinco tratamientos (Fig. 2, cuadrados). En este momento, las células tratadas mostraron aproximadamente un 30% menos de duplicaciones en comparación con el grupo de control. El período de duplicación en las células tratadas fue 162,5 ± 0,5 h en comparación con 32,6 ± 0,5 h en las células de control.

A) Número de duplicaciones de población y B) tiempo de duplicación después del tratamiento a largo plazo con quelidonina (0,01 diamantes o 0,05 µM cuadrados) en comparación con las células MCF7 de control no tratadas (triángulos).

La chelidonina redujo fuertemente la longitud de los telómeros en MCF7

La longitud media relativa de los telómeros se puede medir mediante MMQPCR utilizando cebadores que se hibridan con las repeticiones del hexámero de los telómeros porque el número de sitios de unión para los cebadores aumenta a medida que aumenta la longitud media de los telómeros [37,38]. Sin embargo, MMQPCR cuenta simultáneamente el número de copias de albúmina como un gen de copia única en cada tubo de reacción usando un par de cebadores específico, por lo que se mide la cantidad relativa de copias de telómeros (T) a albúmina (S) del control no tratado. En la figura 3 se muestra un experimento representativo de los efectos potenciales de la quelidonina en las células MCF7. El valor T / S de las muestras tratadas en tratamientos secuenciales, 48 ​​h por pase, se comparó con el de las células no tratadas, que se consideró como 1 (triángulos). Las células tratadas con quelidonina 0,01 µM mostraron solo una disminución menor en la longitud de los telómeros después de varios tratamientos ya que la relación no fue establemente inferior a 1. Sin embargo, se observó una relación T / S disminuida poco después del tratamiento con quelidonina 0,05 µM (cuadrados). La disminución de la relación T / S continuó a menos de 0,3 después de 5 tratamientos secuenciales, lo que implica un acortamiento de los telómeros a aproximadamente el 30% de las células de control no tratadas. Se observó una rápida pérdida de telómeros a 0,1 µM de quelidonina (círculos), de modo que la aplicación de placas se hizo imposible después de sólo tres tratamientos secuenciales.

Los datos representados son el promedio de dos experimentos independientes, cada uno por duplicado ± valores SD.

Chelidonine suprime fuertemente la actividad de la telomerasa y la transcripción de hTERT

Las mediciones cuantitativas del protocolo de amplificación de repetición de telomerasa (qTRAP) mostraron una reducción considerable de la actividad de la telomerasa en las células MCF7 tratadas. En otras palabras, la quelidonina reduce la telomerasa activa en función del tiempo y de la dosis. La figura 4A muestra la actividad relativa de la telomerasa de las células MCF7 después de tratamientos de 24, 48 y 72 h con diversas concentraciones de quelidonina. La actividad de la telomerasa se redujo ≥40% después de 48 h de tratamiento con quelidonina 0,1 μM. El IC50 El valor de la inhibición de la telomerasa en las células tratadas en este momento fue de 0,45 ± 0,08 µM (P≤0,05). El método mide la cantidad funcional de la enzima en cantidades iguales de proteína total. La chelidonina también mostró una fuerte supresión de la transcripción de hTERT que dependía tanto del tiempo como de la concentración (Fig. 4B). La actividad enzimática disminuida y el nivel de ARNm de hTERT después de 48 h muestran casi el mismo patrón, mientras que en un tiempo más corto, 24 h, la disminución de la transcripción precede a la pérdida de actividad enzimática.

A) Actividad de la telomerasa medida por el ensayo q-TRAP y B) niveles de transcripción de hTERT usando la técnica de RT-PCR cuantitativa en tiempo real en células MCF-7 después de varios tiempos de tratamiento con diferentes concentraciones de quelidonina. Se presentó el valor medio ± SEM de tres experimentos lógicamente independientes, cada uno con tres muestras para cada punto. (p≤0.01 en comparaciones por pares a través de la prueba de Tukey HSD a menos que se marque como + / # / * en la gráfica que evalúa p ≤0.05. “o” no representa significación).

La chelidonina inhibe el crecimiento celular de forma reversible

Las células MCF7 que se trataron una vez durante 48 h con quelidonina 0,1 u 8 µM retuvieron parte de su viabilidad / tasa de crecimiento en comparación con las células de control no tratadas (Fig. 5). Además, las células tratadas secuencialmente 2 o 3 veces con quelidonina 0,05 µM recuperaron su velocidad de crecimiento después de que el compuesto se eliminó del medio. Sin embargo, después de cuatro tratamientos, el crecimiento celular fue tan lento que fue imposible volver a sembrar. Como se ve en la Fig. 5, esto muestra que la inhibición del crecimiento por la quelidonina es reversible. Las células recuperaron principalmente su crecimiento después de eliminar la quelidonina hasta donde se observó.

Se presentaron los valores medios ± DE de nueve muestras.

Chelidonine cambia el patrón de empalme de hTERT hacia variantes de codificación no enzimáticas

La chelidonina redujo el nivel de transcripción total de la dosis de hTERT de forma dependiente, como se ve en la Fig. 4. Los cebadores utilizados no pueden diferenciar entre las variantes. Sin embargo, la telomerasa, que se regula principalmente a nivel de transcripción, también tiene transcripciones que no codifican enzimas. Las transcripciones de hTERT se someten a un empalme alternativo especial en MCF-7, que da como resultado al menos cuatro variantes de empalme diferentes. Entre ellos, la variante –β siempre figura como la forma más abundante, mientras que la variante de longitud completa es la única activa. La chelidonina indujo un cambio claro en el patrón de corte y empalme de las transcripciones de hTERT, aunque solo a concentraciones relativamente altas (Fig. 6). La transcripción completa casi desapareció en el LD50 valor, mientras que todavía es visible con el tratamiento de quelidonina 2 μM. Esto implica que el empalme de hTERT no se ve afectado considerablemente por concentraciones bajas de quelidonina. Sin embargo, las concentraciones altas suprimen tanto la transcripción total como la variante activa de longitud completa de hTERT.

Los productos de la PCR se analizaron mediante electroforesis en gel (geles de agarosa al 3%). Las flechas blancas muestran la ubicación de cuatro variantes de empalme en células no tratadas. La banda superior es la hTERT funcional de longitud completa (FL, 457 pb), seguida de las tres variantes de codificación no enzimáticas más cortas. Carril 1: control negativo, 2: tratamiento con quelidonina 5 μM, 3: tratamiento con quelidonina 2 μM, 4: control sin tratar y marcador de ADN 5: 100 pb del cual se cargaron 10, 10, 10, 5 y 5 μl respectivamente como se ve en la Fig. 4B, la transcripción total de hTERT fue fuertemente reprimida mientras que la isoforma principal es menos beta. Se cargaron cinco microlitros de productos de PCR de β2-microglobulina de las muestras relacionadas como control en la parte inferior.


El acortamiento de los telómeros protege contra el cáncer

A medida que pasa el tiempo, las puntas de los cromosomas, llamadas telómeros, se acortan. Este proceso se ha considerado durante mucho tiempo como un efecto secundario no deseado del envejecimiento, pero un estudio reciente muestra que, de hecho, es bueno para usted.

& # 8220 Los telómeros protegen el material genético & # 8221, dice Titia de Lange, profesora Leon Hess en Rockefeller. & # 8220El ADN de los telómeros se acorta cuando las células se dividen, deteniendo finalmente la división celular cuando se agota la reserva de telómeros. & # 8221

Los nuevos resultados del laboratorio de De Lange # 8217 proporcionan la primera evidencia de que el acortamiento de los telómeros ayuda a prevenir el cáncer en humanos, probablemente debido a su poder para reducir la división celular. Publicado en eLife, Los hallazgos se obtuvieron mediante el análisis de mutaciones en familias con antecedentes de cáncer excepcionales y presentan la respuesta a una pregunta de hace décadas sobre la relación entre los telómeros y el cáncer.

Una controversia de larga data

En las células madre, incluidas las que generan óvulos y espermatozoides, los telómeros son mantenidos por la telomerasa, una enzima que agrega ADN telomérico a los extremos de los cromosomas. Sin embargo, la telomerasa no está presente en las células humanas normales, razón por la cual sus telómeros se marchitan. Este programa de acortamiento de telómeros limita el número de divisiones de células humanas normales a aproximadamente 50.

La idea de que el acortamiento de los telómeros podría ser parte de la defensa del cuerpo contra el cáncer se propuso por primera vez hace décadas. Una vez que una célula tumoral en etapa temprana se ha dividido 50 veces, los científicos imaginaron que el agotamiento de la reserva de telómeros bloquearía el desarrollo del cáncer. Solo aquellos cánceres que logran activar la telomerasa romperían esta barrera.

Las observaciones clínicas parecían apoyar esta hipótesis. & # 8220 La mayoría de los cánceres clínicamente detectables han reactivado la telomerasa, a menudo a través de mutaciones, & # 8221 de Lange. Además, los experimentos con ratones demostraron que acortar los telómeros puede proteger contra el cáncer. No obstante, la evidencia del sistema supresor de tumores de los telómeros siguió siendo esquiva durante las últimas dos décadas, y su existencia en humanos siguió siendo controvertida.

La solución a un problema de décadas

La vía del supresor de tumores de telómeros solo puede funcionar si nacemos con telómeros de la longitud adecuada; si los telómeros son demasiado largos, la reserva de telómeros no se agotaría a tiempo para detener el desarrollo del cáncer. Los telómeros más largos proporcionarán a las células cancerosas divisiones adicionales durante las cuales las mutaciones pueden introducirse en el código genético, incluidas las mutaciones que activan la telomerasa.

Durante décadas, el laboratorio de De Lange ha estado estudiando el complejo proceso mediante el cual se regulan los telómeros. Ella y otros identificaron un conjunto de proteínas que pueden limitar la longitud de los telómeros en células humanas cultivadas, entre ellas una proteína llamada TIN2. Cuando se inhibe TIN2, la telomerasa se vuelve salvaje y alarga demasiado los telómeros. Pero no se sabía si TIN2 también regulaba la longitud de los telómeros al nacer.

El estancamiento en el supresor de tumores de telómeros continuó hasta que los médicos del Centro Médico de la Universidad de Radboud en Holanda se comunicaron con De Lange sobre varias familias propensas al cáncer. Los médicos encontraron que estas familias tenían mutaciones en TINF2, el gen que codifica la proteína TIN2 que es fundamental para controlar la longitud de los telómeros. Eso fue cuando le pidieron a De Lange que interviniera.

Isabelle Schmutz, una Mujeres & # 038Science becario postdoctoral en el laboratorio de Lange, utilizó la tecnología de edición de genes CRISPR para diseñar células con exactamente las mismas mutaciones que las observadas en las familias holandesas y examinó las células mutantes resultantes. Descubrió que las células mutantes tenían telómeros completamente funcionales y no tenían inestabilidad genómica. Eran, a todos los efectos, células sanas normales.

Pero había una cosa mal con las células. & # 8220Sus telómeros se volvieron demasiado largos & # 8221 de Lange. Del mismo modo, los telómeros del paciente eran inusualmente largos. & # 8220Estos pacientes tienen telómeros que están muy por encima del percentil 99, & # 8221 de Lange.

& # 8220Los datos muestran que si & # 8217 nace con telómeros largos, tiene un mayor riesgo de contraer cáncer & # 8221, dice De Lange. & # 8220 Estamos viendo cómo la pérdida de la vía supresora de tumores de telómeros en estas familias conduce a cáncer de mama, cáncer colorrectal, melanoma y cánceres de tiroides. Estos cánceres normalmente se habrían bloqueado por el acortamiento de los telómeros. El amplio espectro de cánceres en estas familias muestra el poder de la vía supresora de tumores de telómeros. & # 8221

El estudio es una demostración del poder de la ciencia básica para transformar nuestra comprensión de la medicina. & # 8220Cómo se regulan los telómeros es un problema fundamental, & # 8221 de Lange. & # 8220Y al trabajar en un problema fundamental, finalmente pudimos comprender los orígenes de una enfermedad humana. & # 8221

Contacto con los medios
Katherine Fenz
[correo electrónico & # 160 protegido]

Fuente original

https: / / www. rockefeller. edu / noticias / 29625-acortamiento-de-telómeros-protege-el-cáncer /


Acortamiento de los telómeros e implicaciones para el cáncer y el envejecimiento en humanos

Los telómeros son secuencias de nucleótidos especializadas y altamente conservadas ubicadas en los extremos de los cromosomas que constan de varios cientos de repeticiones de nucleótidos ricas en seis G en tándem en la dirección 5 'a 3'. Los telómeros desempeñan varias funciones importantes en las células humanas, incluida la protección contra la degradación y la recombinación homóloga. A medida que las células se duplican, la longitud de los telómeros se acorta con cada ronda o replicación, lo que deja a los cromosomas menos protegidos con el tiempo. En los seres humanos, se ha determinado que las tasas de acortamiento de los telómeros son de 20 a 60 pares de bade por año, según el tipo de tejido. Los telómeros tienen una estructura y función dinámicas, ya que cambia a medida que las células envejecen. Existe una diferencia característica entre los telómeros que se encuentran en las células somáticas humanas y los que se encuentran en las células cancerosas. Hay muchas aplicaciones para las células con telomerasa activa en la investigación y las terapias contra el cáncer. Esta revisión describe la estructura y formación de los telómeros y analiza su función a medida que las células envejecen. También se revisará el papel de los telómeros en las células cancerosas.

Los telómeros están ubicados en los extremos de los cromosomas lineales que funcionan para proteger sus extremos. Los telómeros consisten en varios cientos de repeticiones de nucleótidos ricas en G en tándem en la dirección 5 'a 3'. En los seres humanos, esta secuencia es AGGGTT. La longitud de los telómeros varía según el tipo de tejido [1]. Los telómeros pueden formar un bucle telomérico (bucle en T) en el extremo de los cromosomas lineales que proporcionan una protección más amplia [2].

En las células somáticas, los telómeros se acortan con cada ronda de división celular. A medida que los telómeros se acortan, los extremos de los cromosomas se vuelven cada vez más vulnerables [3]. Sin embargo, el acortamiento de los telómeros no ocurre en la mayoría de las células cancerosas. Las células cancerosas demuestran la actividad de la telomerasa a lo largo de su vida, lo que permite que las células se vuelvan "inmortales" [4]. Si bien todas las células contienen telomerasa, generalmente solo está activa durante el desarrollo, más específicamente durante la fase G1 [5]. La telomerasa solo permanecerá activa en las células que también expresan la transcriptasa inversa de la telomerasa humana activa (hTRT) [6]. Una mejor comprensión del papel de la hTRT en las células cancerosas puede conducir a tratamientos más avanzados contra el cáncer. La hTRT y otras proteínas asociadas pueden ser el objetivo de terapias farmacológicas específicamente, ya que no es activa en otras células somáticas [7].

Función y estructura de los telómeros La principal función conocida de los telómeros es proteger a los cromosomas lineales de la degradación en su extremo. Las estructuras de bucle en T se forman en los extremos de los cromosomas haciendo un bucle de 3 'en el extremo del cromosoma hacia atrás y permitiendo que se incruste en la porción bicatenaria del cromosoma. Este proceso está mediado por las proteínas teloméricas de unión a repetición, TRF1 y TRF2 [8]. TRF1 y TRF2 están incluidos en un complejo llamado complejo de refugio. Consiste en TRF1, TRF2, TIN2, Rap1, TPP1 y Pot1 y funciona para proteger los extremos de los cromosomas formando y manteniendo telómeros [9].

TRF2 actúa para secuestrar el extremo monocatenario de los telómeros e incrustarlo dentro de una sección bicatenaria del telómero. Esto da como resultado una estructura de triple hebra en el punto de inserción que forma un pequeño bucle de desplazamiento (bucle D) [10]. Los datos muestran que TRF2 está localizado en la unión del bucle D y TRF1 se encuentra en la porción bicatenaria del telómero. Si bien TRF2 se ha clasificado como una proteína de unión a telómeros de doble hebra, los datos experimentales muestran que la sobreexpresión de una línea celular TRF2 negativa dominante tiene un efecto sobre la porción de una sola hebra del telómero. También condujo a la activación de la vía de apoptosis de p53 [8].

Durante la replicación del ADN en las células somáticas, la polimerasa no puede replicar el extremo 3 'de la hebra rezagada de ADN (Figura 1. a-c). Como resultado, con cada ronda de replicación, sus cromosomas están cada vez menos protegidos [3]. Se han establecido asociaciones entre la longitud de los telómeros y la edad de los cromosomas [11]. Con cada ronda de replicación, se pierden entre 20 y 60 pares de bases en el telómero, este número depende del tipo de tejido [11].

Otras funciones incluyen la prevención de la recombinación homóloga en los extremos de los cromosomas lineales [3] y la prevención de la activación de la apoptosis prematura [8]. El trabajo realizado por Griffith, et al. muestran que el agotamiento de TRF2 conduce, entre otras cosas, a la activación de un punto de control de ruptura de doble hebra. Este punto de control señala la vía de p53 que a menudo conduce a la apoptosis. Todo esto en conjunto sugiere la necesidad de telómeros para mantener la integridad de los cromosomas [8].

Lazos en T Los bucles en T se descubrieron en los laboratorios Griffith y de Lange en 1999, cambiando la forma en que se entendía anteriormente la estructura de los telómeros. Anteriormente se creía que los cromosomas terminaban en un saliente de 3 'con una repetición rica en GT. Klobutcher y col. proporcionaron la primera indicación de que hay conservación entre varias especies en los extremos de los cromosomas, reconocieron que existe una longitud variable entre las especies, pero que todas contienen el mismo saliente 3 'en la cadena rica en G [12]. La comprensión actual de la función de los telómeros se descubrió en el laboratorio de Griffith en 1999. Utilizando microscopía electrónica, la estructura final de los cromosomas se visualizó como un bucle. Griffith y col. describen un bucle de desplazamiento de tres hebras (bucle en D) que se pliega permitiendo que el voladizo de una sola hebra se meta en la estructura de doble hebra. Este proceso se logra secuestrando proteínas, TRF1 y TRF2 [8].

TRF1 y TRF2 secuestran el extremo 3 'monocatenario del telómero y lo devuelve para formar un bucle en T. Mientras TRF1 actúa para alinear las secuencias bicatenarias del bucle T, TRF2 cierra el bucle insertando la cadena simple en una sección de la sección bicatenaria del telómero y formando una estructura de bucle D [8].

El descubrimiento de la telomerasa La telomerasa fue descubierta por primera vez por Carol Greider y Elizabeth Blackburn en 1985. Greider y Blackburn describieron por primera vez la telomerasa como transferasa terminal del telómero y luego fueron capaces de caracterizarla como una ribonucleoproteína de ARN [10] [13]. El descubrimiento de la telomerasa abrió el campo a nuevas investigaciones poco después del descubrimiento inicial en Termófilo tetrahymena, Jack Szostak descubrió la actividad de la telomerasa en las células HeLa humanas. Las células HeLa se aislaron de la paciente con cáncer de ovario, Henrietta Lacks, varios años antes y se acuñaron las células inmortales. Hasta ese momento, se desconocía qué hacía que estas células fueran inmortales. Esta era fue el comienzo de una nueva comprensión del envejecimiento celular [4].

En 2009, el Premio Nobel de Fisiología o Medicina fue para Elizabeth Blackburn, Carol Greider y Jack Szostak por su trabajo sobre la función de los telómeros y el mecanismo de la telomerasa [14].

Regulación de la telomerasa La telomerasa es un complejo de ribonucleoproteína que contiene una subunidad de ARN telomérico (TR), un núcleo catalítico y transcriptasa inversa de telomerasa (hTRT). También está rodeado por varias proteínas accesorias [14]. El componente TR de la telomerasa es una secuencia de ARN complementaria a las secuencias repetidas que se encuentran en el telómero en humanos; esta secuencia es 3′-CAAUCCCAAUC-5 ′ [15]. Curiosamente, solo 6 nucleótidos de esta secuencia se repiten en los telómeros, los otros actúan para orientar la telomerasa en el ADN. La secuencia de la plantilla de ARN funciona como un cebador en el saliente 3 'de la hebra rezagada durante la replicación del ADN (Figura 1. d). La telomerasa se mueve paso a paso en la dirección 5'-3 ', agregando continuamente repeticiones de 6 nucleótidos de largo (Figura 1. e). Una vez que se completa este paso, la ADN polimerasa α puede completar el alargamiento de la hebra rezagada (Figura 1. F) [1].

La subunidad catalítica de la telomerasa en Homo sapiens es la transcriptasa inversa de la telomerasa humana (hTRT) [6]. Nakayama y col. caracterizó la hTRT midiendo la actividad de la telomerasa en células de fibroblastos humanos que sobreexpresan la hTRT. Pudieron ver que cuando la hTRT se sobreexpresa en células negativas a la telomerasa, se induce la actividad de la telomerasa. En las células que contienen mutaciones de hTRT, la actividad de la telomerasa no se induce, lo que caracteriza las relaciones entre la hTRT y la actividad de la telomerasa. Esto los llevó a medir la actividad en las células hepáticas cancerosas y en las células hepáticas no cancerosas, donde vieron resultados consistentes. Llegaron a la conclusión de que la hTRT es la proteína catalítica responsable de activar la telomerasa y que desempeña un papel importante en la inmortalidad de las células cancerosas [6].

Telómeros y envejecimiento

La proteína supresora de tumores p53 es responsable de imponer la apoptosis y la detención del ciclo celular. A medida que los telómeros se acortan críticamente a longitudes peligrosas, se activa p53 y se promueve la senescencia. La senescencia es cuando las células ya no se replican, lo que eventualmente conduce a la apoptosis [16]. Este mecanismo permite a las células mantener la integridad de sus cromosomas. Aquellos con telómeros hiperecortados pierden su protección y están sujetos a translocaciones, deleciones, recombinación homóloga y otros daños [7]. Este tipo de daño puede provocar envejecimiento tisular y trastornos degenerativos [16].

Algunos fenotipos de envejecimiento en humanos pueden contribuir a acortar las longitudes de los telómeros, como se muestra en los ratones knockout para la telomerasa. Los ratones con inactivación de la telomerasa en las últimas generaciones muestran signos de envejecimiento, incluido el pelaje gris y la incapacidad para responder a factores estresantes físicos como la reparación de heridas. Muchos de los fenotipos observados correlacionados con los órganos internos de la piel, incluidos los riñones, el cerebro y el sistema cardiovascular, no muestran un envejecimiento avanzado con telómeros acortados [18]. Si bien esta información se muestra prometedora en el campo de los telómeros y el envejecimiento, no se puede aplicar directamente a los humanos. Los telómeros de los ratones oscilan entre 50 y 150 kpb, mientras que en los humanos tienen una longitud de aproximadamente 15 kpb. Esto, combinado con la corta vida útil de los ratones en comparación con los humanos [17], sugiere que la inestabilidad de los cromosomas con telómeros acortados probablemente dependa más de la vulnerabilidad que de su longitud acortada real. Una menor protección telomérica en los extremos de los cromosomas expuestos puede provocar recombinación y cáncer.

Los cromosomas envejecidos con telómeros acortados tienen una correlación con anomalías como las fusiones robertsonianas (fusiones de extremo a extremo). También se correlacionan con la generación espontánea de tumores. Se observó la generación de cáncer en ratones knockout para la telomerasa; hubo una correlación significativa en la generación de tumores en tejidos que se ha demostrado que son dependientes de la telomerasa, como la piel y los testículos [18].

Telómeros y cáncer

Telomerase activity in cancer cells The majority of cancer cell lines have activated telomerase activity giving them an extended, and sometimes immortal, life [4]. An estimated 80% of tumors contain active telomerase throughout their lifespan. It was recently shown that these telomerase positive tumors also express contain long interspersed nuclear elements-1 (LINE-1) which are responsible for telomere maintenance in pathological cells [19]. cMyc and Krüppel-like factor-4 (KLF-4) are potential oncogenes cMyc codes for a transcription factor while KLF-4 is a transcription factor itself. When Aschacher et al performed LINE-1 knockdown, they observe increased telomere dysfunction and decreased levels of cMyc and KLF-4 were also knocked down. This suggests that LINE-1 acts as a regulatory element by means of cMyc y KLF-4 [19].

Cancer cells as research tools The research done by Aschacher et al. proposes LINE-1 as a rational target for inhibiting telomerase activity in cancer cells. Their experimentation shows that G2 cell cycle arrest is observed in LINE-1 depleted cell lines. This suggests that inhibition of the effects of LINE-1, either by directly targeting it or through cMya y KLF-4 , could be an effective way of repression tumor growth as LINE-1 is only found in active tumor cells [19].

Another proposed mark for cancer drugs is TRF2. TRF2 has shown to be essential in the formation of telomeres [8]. TRF2 disruption can impair telomere maintenance and elicit a DNA damage response. A chemical inhibitor is being studied to bind to the TRF2 domain to switch off its signaling [20].

Figure 1: Mechanism of telomerase. (a.) Lagging and leading strands are primed by primase to prepare for elongation by polymerases α and δ (b.). The result is a 3’ overhang on the lagging strand caused by nucleolytic degradation of the 5’ end [23](c.) leaving the chromosome vulnerable to damage and shortening after each round of replication without the action of telomerase (d). Telomerase containing telomeric template attaches to the overhang and elongates (e.) the 3’ overhang with a series of tandem 6 nucleotide repeats. (f). Primase with polymerases α and δ are then able to complete double strand synthesis. Conclusión

The future of research regarding telomeres and cancer research lies in using associated proteins as drug targets. As telomerase activity is noted in 80% of tumor cells, telomerase and its associated proteins are a good place to start. It is a specific target as most adult somatic cells do not have active telomerase [21]. The downfall of this method is that existing cancer cells with elongated telomeres will have to go through significant numbers of cell division until senescence is reached [22].


Stress speeds up aging through telomere shortening

Aging and stress in the workplace: accelerated telomere shortening

Stress in the workplace occurs when there is no balance between what a person perceives the constraints are and how well they feel they can deal with them. Although stress is not a disease, prolonged exposure to it has negative effects on health. It is called chronic stress [5].

Many studies have shown a link between chronic stress in the workplace and a degradation in health. The risk to develop cardiovascular diseases increases as the capacity of the immune system decreases [6]. Although the missing link between stress and health (and aging) has not yet been singled out, we know that it tampers with cell function. However, cell environment plays an important role when regulating telomere length and telomerase activity. Researchers studied healthy women under different levels of chronic stress to determine if it had any impact on telomere length or influence on their physiological age [6].

The subjects under a more important stress had shorter telomeres. On average, there is a 550bp difference in telomere sequence length, no matter the chronological age of the subject, between the subjects undergoing high levels of stress and those with low levels of stress in the workplace [6]. The difference is linked to a 10 years increase of the biological age [6].

In the high-level stress group, telomerase activity is 48% lower than in subjects in the group with lower levels of stress. When this decrease of telomerase activity becomes chronic, it contributes to accelerated telomere shortening [6].

This proves the influence of extracellular factors, such as stress in the workplace, on telomere shortening. It would then be strongly linked to an increase in oxidative stress, a decrease of telomerase activity and an acceleration of telomere shortening. All of these would result in early cell senescence [4], which impacts the lifespan of the cells as well as the physiological age.


Telomeres are repeated DNA sequences that form the end caps of chromosomes. A little of their length is lost with each cell division, and cells self-destruct or become senescent and cease replication when telomeres become too short. This is a part of the Hayflick limit on cell replication: near all cells in the body can only divide a limited number of times. Stem cells are the first exception, using telomerase to extend telomeres. Cancer cells are the second exception, employing either telomerase or the alternative lengthening of telomeres (ALT) mechanisms that do not operate in normal cells. Telomere lengthening is a universal mechanism in cancer, and thus there is considerable interest in producing a single class of treatment, based on interference in telomere lengthening, that can potentially shut down all cancers.

The original vision for whole-body interdiction of telomere lengthening, a part of the SENS rejuvenation research agenda, was to turn off the processes that lengthen telomeres throughout the body. Perhaps temporarily, or, in a more futuristic option, perhaps permanently when deployed in conjunction with periodic replacement of stem cell populations. Since the original proposition was put forward, research into ALT hasn't made all that much progress, perhaps because only 10% of cancers exhibit this behavior. Research into interfering with telomerase-based telomere lengthening has progressed, however, and diversified into a number of interesting lines of work. All of these seem likely to be targeted to cancer cells, either as an inherent result of the mechanism, or by combining the therapy with a selective delivery system.

One recent example of many is the work of Maia Biotechnology, building on an approach that sabotages telomerase-based telomere lengthening in a subtle way that has the outcome of killing cells. Today's research materials are another example of a program at an earlier stage of exploration, more focused on an indirect approach to reducing telomerase activity, one that can involve signaling applied outside the cell. This makes it an attractive basis for the development of therapies.

Researchers have in the past provided evidence to suggest that shelterins, proteins that wrap around telomeres and act as a protective shield, might be therapeutic targets for cancer treatment. Subsequently, they found that eliminating one of these shelterins, TRF1, blocks the initiation and progression of lung cancer and glioblastoma in mouse models and prevents glioblastoma stem cells from forming secondary tumours. Now researchers go one step further and describe for the first time how telomeres can be regulated by signals outside the cell that induce cell proliferation and have been implicated in cancer. The finding opens the door to new therapeutic possibilities targeting telomeres to help treat cancer.

Researchers have outlined a link between TRF1 and the PI3K/AKT signalling pathway. This metabolic pathway, which also encompasses mTOR, is one of the pathways most frequently affected in numerous tumorigenic processes. However, it was not known whether preventing TRF1 regulation by this pathway can have an impact on telomere length and its ability to form tumours. AKT acts as a transmitter of extracellular signals triggered by, among others, nutrients, growth factors, and immune regulators, to the interior of cells.

Researchers modified the TRF1 protein in cells to make it unresponsive to AKT, using the gene-editing tool CRISPR/Cas9. This way, TRF1 and the telomeres became invisible to any extracellular signals transmitted by AKT. Telomeres in these cells shortened and accumulated more damage most importantly, the cells were no longer able to form tumours, indicating that telomeres are important targets of AKT and its role in cancer development.

The paper shows that telomeres are among the most important intracellular targets of the AKT pathway to form tumours, since, although neither the function of AKT nor of any of the thousands of proteins that are regulated by it was altered, only blocking AKT's ability to modify telomeres was sufficient to slow tumour growth. The next step will be to generate genetically modified mice with telomeres that are invisible to AKT. The authors anticipate that these mice will be more resistant to cancer.

The telomere-bound shelterin complex is essential for chromosome-end protection and genomic stability. Little is known on the regulation of shelterin components by extracellular signals including developmental and environmental cues. Here, we show that human TRF1 is subjected to AKT-dependent regulation. To study the importance of this modification in vivo, we generate knock-in human cell lines carrying non-phosphorylatable mutants of the AKT-dependent TRF1 phosphorylation sites by CRISPR-Cas9.

We find that TRF1 mutant cells show decreased TRF1 binding to telomeres and increased global and telomeric DNA damage. Human cells carrying non-phosphorylatable mutant TRF1 alleles show accelerated telomere shortening, demonstrating that AKT-dependent TRF1 phosphorylation regulates telomere maintenance in vivo. TRF1 mutant cells show an impaired response to proliferative extracellular signals as well as a decreased tumorigenesis potential. These findings indicate that telomere protection and telomere length can be regulated by extracellular signals upstream of PI3K/AKT activation, such as growth factors, nutrients, or immune regulators, and this has an impact on tumorigenesis potential.

Telomere lengthening is much safer method of avoiding SASP caused by replicative senescence then any senolytic ever would be. Dual inhibitor/activator substances like sylibinin and baicalin (but more potent) would be the best - inhibiting telomerase in cancer cells and activating telomerase in healthy cells at the same time.

the body has powerful method to turn off telomerase - its TGFbeta (part of the SASP) but switching telomerase off doesn't kill cancer - it kills the host.

Oncosens is the part of SENS with the slowest progress. It needs a very good gene editing technology and a very good stem cell replacement technology. Despite the big money put in both, it's not clear at all to me whether they will arrive in time for me or any other middle-aged person.

By hook or by crook we need to defeat cancer comprehensively, or everything else will at best buy us time until the inevitable strikes us all.

@Antonio
Aubrey said, I think, last year, that anti cancer immune therapy is progressing so well that we might not need resort to whole body telomerase..

I know what he said, but immune therapy will never be a comprehensive solution, and anyway I don't see it progressing so fast in the clinic.

WILT is a non-starter to begin with

It's clearly the one part of SENS Aubrey knew he was creating an option which had no merit / potential for human use, about but had to create the 7th bucket

It's the equivalent of using chemotherapy for weight loss

Turning off or getting rid of all telomerase, and then radically improving senolytics, seems like a good technique for enhanced longevity.


SUBSIDIOS

Work in the laboratory of the author is supported by National Institutes of Health Grant AI-29524, Canadian Institutes of Health Research Grant MOP38075, and the National Cancer Institute of Canada (with support from the Terry Fox Run).

We thank Irma Vulto for assistance in the preparation of Figure 6.

Address for reprint requests and other correspondence: P. M. Lansdorp, Terry Fox Laboratory, British Columbia Cancer Agency, Vancouver, British Columbia V5Z 1L3, Canada (e-mail: [email protected] ).