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¿Son citotóxicos los retrovirus?

¿Son citotóxicos los retrovirus?


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Por lo general, hay cientos de retrovirus que se encuentran en saludable seres humanos.

¿Son entonces los retrovirus citotóxicos? (En otras palabras, son capaces de matar o dañar otras células).


Como señala, los seres humanos (y otros organismos) tienen cientos de retrovirus y muchos pueden verse en el genoma humano, algunos de los cuales parecen ser restos de virus desactivados, otros que pueden estar activos. La mayoría de los retrovirus no son patógenos, no causan enfermedades.

Esto se debe a que muchos retrovirus se replican lentamente, brotando y secretando de la superficie celular en pequeñas cantidades sin matar a la célula huésped.

Hay varios retrovirus que causan enfermedades. El virus de la leucemia de células T humanas (HTLV) puede hacer que las células T se repliquen de forma descontrolada, lo que resulta en leucemia. Este no es un resultado necesario para que el HTLV se replique, pero es el resultado de una infección viral, ya que la replicación viral modifica la maquinaria celular para replicarse.

Si bien no está claro exactamente cómo, el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) mata a sus células huésped. Desafortunadamente, los huéspedes del VIH son células inmunes CD4. El hecho de que la replicación esporádica del VIH pueda hacer que todas las células inmunitarias del huésped mueran por completo convierte al VIH en un patógeno.

Por lo general, se piensa que la enfermedad es la falta de adaptación de un patógeno y un hospedador: los virus funcionan mejor si no matan a su hospedador. Ambos casos posiblemente no sean el futuro de ninguno de los virus: cualquiera de ellos podría adaptarse para reproducirse sin causar una enfermedad. O puede que ya lo hayan hecho, habiendo derivado algunas cepas en el grupo de retrovirus silenciosos de los que la ciencia médica no se preocupa.


Virus adenoasociado

Virus adenoasociados (AAV) son pequeños virus que infectan a los humanos y algunas otras especies de primates. Pertenecen al género Dependoparvovirus, que a su vez pertenece a la familia Parvoviridae. Son virus pequeños (20 nm) con replicación defectuosa, sin envoltura y tienen un genoma de ADN monocatenario lineal (ssDNA) de aproximadamente 4,8 kilobases (kb). [1] [2]

Actualmente, no se sabe que los AAV causen enfermedades. Los virus provocan una respuesta inmunitaria muy leve. Varias características adicionales hacen de AAV un candidato atractivo para crear vectores virales para terapia génica y para la creación de modelos de enfermedades humanas isogénicas. [3] Los vectores de terapia génica que utilizan AAV pueden infectar células en división y en reposo y persistir en un estado extracromosómico sin integrarse en el genoma de la célula huésped, aunque en el virus nativo se produce la integración de genes portados por virus en el genoma del huésped. [4] La integración puede ser importante para determinadas aplicaciones, pero también puede tener consecuencias no deseadas. Los ensayos clínicos recientes en humanos que utilizan AAV para la terapia génica en la retina han demostrado ser prometedores. [5]


El papel de los retrovirus endógenos humanos en el origen de las células cancerosas

La incidencia y mortalidad del cáncer, la metástasis, la farmacorresistencia y la recurrencia siguen siendo los problemas críticos de las enfermedades oncológicas. En este escenario, las evidencias científicas crecientes demuestran que la activación de retrovirus endógenos humanos (HERVs) está involucrada en la agresividad de tumores como melanoma, cáncer de mama, de células germinales, renal, ovárico, hepático y hematológico. En su regulación dinámica, los HERV también han demostrado ser determinantes importantes de la pluripotencia en las células madre embrionarias humanas (ESC) y del proceso de reprogramación de las células madre pluripotentes inducidas (iPSC). En muchos tipos de tumores, las características esenciales de agresividad se han asociado con el logro de características de tallo, a menudo acompañadas de la identificación de subpoblaciones definidas, denominadas células madre cancerosas (CSC), que poseen propiedades similares a las de las células madre y sostienen la tumorigénesis. De hecho, las CSC muestran una alta capacidad de autorrenovación con un potencial peculiar en la iniciación, progresión, metástasis, heterogeneidad, recurrencia, radioterapia y farmacorresistencia tumoral. Sin embargo, el papel de los HERV en la biología de las CSC todavía no está completamente aclarado. En este sentido, CD133 es un marcador ampliamente reconocido de CSC, y nuestro grupo demostró, por primera vez, el requisito de activación de HERV-K para expandir y mantener una subpoblación de células de melanoma CD133 + con características de tallo en respuesta a modificaciones microambientales. La revisión discutirá la expresión de HERV como sello distintivo del cáncer, con especial atención a su papel en la regulación de las características de la madre del cáncer y la posible participación como dianas para la terapia.


Los retrovirus pueden promover una tormenta perfecta de enfermedades

Los retrovirus que se analizan aquí no causan enfermedades directamente por sí mismos. Es necesario que se junte una tormenta perfecta de eventos para crear una deficiencia adquirida del sistema inmunológico (no VIH-SIDA). Cuando las condiciones son adecuadas, los virus crean procesos inflamatorios implacables que alteran el sistema inmunológico.

La tormenta perfecta ocurre cuando el ADN humano es alterado por retrovirus, cuando hay coinfecciones, cuando hay un shock o trauma severo, cuando las hormonas están desreguladas, cuando hay organismos genéticamente modificados y glifosato en la dieta, cuando hay pesticidas y otros. sustancias tóxicas en los alimentos y el medio ambiente, y cuando existen susceptibilidades genéticas.

Si algunas o todas estas afecciones ocurren juntas, entonces el sistema inmunológico se debilitará hasta el punto en que ocurra la tormenta perfecta y las personas se enfermen con algún tipo de enfermedad crónica moderna.

No todos los que tienen retrovirus en sus cuerpos desarrollarán una de estas enfermedades, pero para aquellos que experimentan una tormenta perfecta, la posibilidad es mucho mayor. Los riesgos aumentan con la edad a medida que el sistema inmunológico se debilita naturalmente.


Discusión

La detección eficiente por parte del sistema inmunológico innato es el primer paso hacia una respuesta inmunitaria antiviral eficaz. En un esfuerzo por determinar qué vías de detección innatas son críticas para las infecciones por retrovirus en vivo, los ratones deficientes en varios sensores innatos se infectaron con retrovirus murinos como MuLV. Anteriormente, se demostró que TLR7 y MyD88 eran necesarios para una potente respuesta inmune humoral antirretroviral [11, 12]. Sin embargo, las respuestas de las células T solo se vieron afectadas parcialmente por la señalización de MyD88 y no existen datos sobre los sensores necesarios para la actividad de las células NK. Aquí, demostramos por primera vez que la detección de TLR3 está involucrada en las respuestas de células T citotóxicas y células NK durante la infección aguda por FV.

Curiosamente, no se observaron diferencias en las cargas virales entre los ratones de tipo salvaje y deficientes en MyD88 durante la infección aguda (hasta 1 & # x000a0 semana después de la infección) [11]. Nuestros datos que muestran que TLR7 no afecta la infección aguda por FV (ver Figura & # x000a0 1 C) son consistentes con este hallazgo, pero contrastan con los datos recientes del mismo grupo [30]. Presumimos que la falta o el impacto inconsistente de TLR7 / MyD88 en la infección aguda por FV puede reflejar el hecho de que las respuestas de anticuerpos neutralizantes no juegan un papel significativo en la inhibición de FV en los primeros momentos de infección [31]. En particular, en puntos de tiempo posteriores (comenzando 2 & # x000a0 semanas después de la infección) las cargas virales aumentaron en ratones MyD88 & # x02212 / & # x02212, de acuerdo con una respuesta inmune humoral debilitada. Recientemente proporcionamos evidencia de que las respuestas de las células NK podrían inhibir significativamente la replicación aguda de FV en vivo [14]. Por tanto, nuestros hallazgos que muestran una replicación FV aguda mejorada en ratones TLR3 & # x02212 / & # x02212 son consistentes con un fuerte impacto de TLR3 en las respuestas de las células NK citotóxicas. TLR3 está fuertemente expresado por mDC, mientras que su expresión es débil en subconjuntos de células B murinas [32]. Por el contrario, TLR7 está altamente expresado por células B foliculares, zona marginal B, parche B y B-1B de Peyer & # x000b4s y el nivel de expresión en CDm es bastante bajo [32]. Esto puede explicar que se requiere TLR7 para respuestas de anticuerpos eficientes [11, 12], ya que podría influir directamente en las respuestas de las células B y no en las respuestas de las células T o NK.

Otros sensores innatos conocidos para infecciones retrovirales son cGAS [2], DC-Sign [6], TLR9 [33] y proteína antiviral de dedo de zinc [34]. Se observó que todos eran importantes para la inducción de IFN de tipo I por los retrovirus, pero hasta ahora no se ha investigado su influencia sobre las respuestas inmunitarias celulares o humorales. Las respuestas inmunitarias antivirales pueden verse afectadas por muchos sensores, que se describieron para otras infecciones virales. Esto depende del tipo de célula huésped y del momento de la infección. Especialmente los TLR no se expresan de forma ubicua, sino más bien por células inmunitarias específicas como mDC, pDC, macrófagos, células B y otras [35 - 37]. Otros PRR como MDA5 o Rig-I se encuentran en el citosol de casi todos los tipos de células, lo que los convierte en sensores generales eficientes para las infecciones virales. Para la infección por el virus de la influenza, se demostró que se requieren varios PRR para la inducción eficaz de respuestas inmunes antivirales. La infección por el virus de la influenza es detectada por muchos PRR diferentes (TLR3, TLR7 y Rig-I) (revisados ​​en [38]), y todos tienen distintas influencias sobre las respuestas inmunes celular y humoral contra el virus. Se demostró que la señalización de TLR3, TLR7 y MyD88 no es necesaria para las respuestas T eficaces durante la infección por influenza [39,40], pero tanto TLR7 como MyD88 son fundamentales para las respuestas de las células B durante la infección por influenza [40]. Koyama y sus colegas investigaron que el Rig-I tampoco es necesario para una potente respuesta de las células T CD8 +, mientras que las células B y las células T CD4 + requieren MyD88 y Rig-I [39]. Los estudios de vacunación contra el virus del Nilo Occidental (VNO) revelaron que tanto MyD88 como TLR3 son necesarios para una respuesta inmunitaria humoral eficaz [41], y durante una infección por VNO Rig-I y MDA5 [42-44], así como TLR3 y TLR7 [45, 46] participan en el reconocimiento inmunológico. La infección por el virus de la encefalomielitis murina de Theiler requiere la detección de TLR3 y MDA5 [47,48]. Tabeta et al. Informaron que durante la infección por citomegalovirus de ratón, la deficiencia de TLR3 y TLR9 aumenta la infección debido a la reducción de la secreción de IFN tipo I y la activación de las células NK [49]. Esto demuestra que en muchas infecciones virales las respuestas inmunitarias son iniciadas por varios sensores y distintos PRR tienen funciones únicas durante la defensa viral.

El receptor 3 tipo Toll reconoce el ARN bicatenario durante las infecciones virales [15]. Los retrovirus consisten en dos hebras de ARN monocatenarias que están entrelazadas dentro del núcleo. Junto con las proteínas virales, construyen un complejo de ARN dimérico [50]. Estas cadenas de ARN forman estructuras secundarias de alto orden, como lazos de tallo, que podrían ser el objetivo de TLR3 [17,18,51-53]. Un estudio reciente podría mostrar que TLR3 reconoce las estructuras del tallo en el ARN viral monocatenario [54], lo que indica que TLR3 es un posible sensor inmune de retrovirus.

En un estudio anterior, hemos utilizado un ligando sintético para TLR3 (poliinosínico: ácido policitidílico, poli I: C) para tratar ratones durante la infección aguda por FV [55]. La estimulación de TLR3 dio como resultado una reducción significativa de las cargas virales y previno la esplenomegalia inducida por virus, así como la aparición de eritroleucemia letal. Demostramos que las respuestas de las células T CD8 + y especialmente su citotoxicidad (CD107a, expresión de GzmB) se mejoraron mediante la activación de TLR3 [55]. Sin embargo, la estimulación de TLR3 por sí sola todavía no puede mediar la eliminación viral completa en infecciones retrovirales que conducen al desarrollo de infecciones crónicas.

Otros demostraron que la estimulación de macrófagos con poli I: C reduce la infección por VIH-1 in vitro [56-59] que depende de la expresión de microARN-155 [60]. Vectores lentivirales [61] así como in vitro Se demostró que el ARNm de gag del VIH-1 transcrito [62] era detectado por TLR3. Otra observación interesante informó que un polimorfismo común en el TLR3 humano media la protección del VIH-1 por el aumento de la activación de las PBMC y la producción de las citocinas proinflamatorias IL-6 y CCL-3 [63]. Esto indica que dirigirse a TLR3 durante las infecciones retrovirales podría mejorar la respuesta inmune del huésped y, por lo tanto, reducir las cargas virales, lo que convierte a TLR3 en un objetivo potencial para las inmunoterapias antirretrovirales.


Conclusión

En resumen, utilizamos ratones TLR3 - / - para investigar el papel de TLR3 en la inmunidad antirretroviral utilizando el modelo de ratón con retrovirus Friend. Las cargas virales aumentaron significativamente en estos ratones, revelando que TLR3 participa en la inmunidad anti-FV durante la infección aguda. Específicamente, la citotoxicidad de las células NK y las células T CD8 + se deterioró significativamente en los ratones TLR3 - / - en comparación con los de los controles de tipo salvaje. El desencadenamiento de la activación de TLR3 podría estimular las células efectoras citotóxicas para eliminar las células infectadas por virus y, por lo tanto, sería de interés para tratar infecciones retrovirales.


Por qué las vacunas COVID-19 podrían afectar la fertilidad

Version en español

Sorprendente similitud entre las sincitinas humanas y la proteína de pico sars-cov-2: por qué las vacunas covid-19 podrían afectar la fertilidad

Las vacunas COVID-19 llevan la proteína de pico (S o & # 8220Spike & # 8221) del virus SARS-CoV-2 como un presunto antígeno para desencadenar la respuesta inmune, que comparte una alta similitud genética y proteica con dos proteínas humanas, Sincitin-1 y Sincitin-2.

Las sincitinas humanas son producto de la expresión de los genes de la envoltura (Env) de los retrovirus endógenos humanos (HERV): son proteínas que median la fusión entre células y tienen propiedades inmunosupresoras.

Las sincitinas se expresan fisiológicamente durante el embarazo: intervienen en el desarrollo de la placenta, la diferenciación del trofoblasto, la implantación del embrión en el útero de la madre y la inmunosupresión del sistema inmunológico de la madre para prevenir el rechazo alogénico del embrión.

Debido a la similitud entre las sincitinas y la proteína de pico del SARS-CoV-2, las respuestas de anticuerpos inducidas por la vacuna COVID-19 podrían desencadenar una reacción cruzada contra las sincitinas, causando efectos secundarios alérgicos, citotóxicos y / o autoinmunes que afectan la salud humana y la reproducción.

Las vacunas de ARNm tienen el potencial de modificar el ADN humano mediante el mecanismo de silenciamiento de genes mediado por ARN de interferencia. El gen de sincitina podría silenciarse mediante el uso de inhibidores de oligonucleótidos antisentido. Cuando el ARNm o la cantidad de proteína sincitina disminuye, ocurren defectos severos en la placenta, mala diferenciación del trofoblasto humano y disfunción vascular placentaria, lo que lleva a la pérdida de la gestación.

Las empresas que desarrollan las vacunas COVID-19 no están actuando de manera ética y responsable, porque no realizan los estudios de seguridad en los modelos animales adecuados, no están respetando los tiempos requeridos para detectar efectos adversos en el mediano y largo plazo y, además , no proporcionan la información sobre la verdadera composición de la vacuna, que consideran & # 8220 confidencial & # 8221.

No se informa adecuadamente a los voluntarios de todos los riesgos que entraña la vacunación. Al avanzar y acortar las fases experimentales, las empresas están trasladando el riesgo de los animales a los humanos, utilizando a las personas como modelos de desafío animal.

Las consecuencias de inocular genes extraños con vacunas COVID-19 pueden ser catastróficas para el destino de la humanidad, considerando el papel de las proteínas de la envoltura de HERV (sincitinas) en la fisiología humana y sus posibles efectos patogénicos en varios tipos de cánceres y trastornos autoinmunes.

La sorprendente similitud entre las proteínas retrovirales humanas endógenas y la proteína espiga del SARS-COV-2.

Investigadores científicos y médicos calificados advierten a la comunidad internacional del peligro que representan las vacunas contra COVID-19 y piden a las autoridades que detengan de inmediato los ensayos clínicos de Fase III de vacunas que contienen la proteína de pico (S o & # 8220Spike & # 8221) mRNA de el virus SARS-CoV-2 1, 2.

Una de las razones de esta solicitud urgente se basa en el hecho de que la proteína S, contra la que compiten los fabricantes de vacunas para desarrollar una vacuna, comparte un alto grado de similitud genética y proteica (es decir, es altamente homóloga en la secuencia de nucleótidos). y aminoácidos) a dos proteínas humanas codificadas por genes ubicados en los cromosomas 7 y 6, los llamados Sincitin-1 y Sincitin-2, respectivamente. (Figura 1)

Figura 1

La sincitina-1 es la proteína de la envoltura del retrovirus humano endógeno W (HERV-W), cuya función es necesaria durante el embarazo para permitir el desarrollo de la placenta y la diferenciación del trofoblasto 3, debido a que interviene en la fusión de las células placentarias. y permite la implantación del embrión en el útero materno 4.

La sincitina-2 es la proteína de la envoltura de otro miembro de la familia HERV (HERV-FRD) y también se expresa en gran medida en la placenta humana 5. Aunque las sincitinas 1 y 2 son proteínas que median en la fusión célula-célula de los citotrofos para permitir la formación de la capa multinucleada del sincitiotrofoblasto durante el desarrollo placentario, la Sincitin-2 (pero no la Sincitin-1) tiene propiedades adicionales, una actividad inmunosupresora que hace que el feto sea invisible para el sistema inmunológico de la madre, evitando así el rechazo alogénico, ya que el embrión es un ser humano único e irrepetible, genéticamente diferente de la madre.

La similitud entre la estructura de las sincitinas y la proteína S del SARS-Cov-2 es realmente sorprendente. La proteína de sincitinas maduras (proteína de envoltura, Env, de retrovirus humanos endógenos, HERV) consiste en un tritio de heterodímeros de dos subunidades, S1 y S2, unidos por un enlace disulfuro lábil entre las dos cadenas, que es escindido por Furine después de S1. Unión al receptor 7, 8, 9. (Figura 2)

Figura 2

La estructura de las sincitinas es la misma que la descrita para la proteína S del SARS-CoV-2. La subunidad S1 del pico se une al receptor y luego la separación entre los dos & # 8211 el corte hecho por la enzima Furina de las subunidades S1 y S2 & # 8211 permite que el virus entre en las células 10.

Curiosamente, el virus SARS-CoV-2 también tiene secuencias idénticas a las sincitinas que le confieren actividad inmunosupresora 11, con lo que el virus logra hacerse & # 8220 invisible & # 8221 al sistema inmunológico de la persona infectada.

¿Por qué las vacunas COVID-19 podrían afectar la fertilidad humana?

En primer lugar, las vacunas experimentales contra COVID-19 podrían afectar la fertilidad humana debido a la gran similitud entre las sincitinas y la proteína de pico del SARS-CoV-2 11.

Aún no sabemos si los anticuerpos generados por la acción de la vacunación COVID-19 podrían reaccionar de forma cruzada con las sincitinas. Si los anticuerpos contra el SARS-COV-2 reconocen los sincitinas humanas, estas proteínas serían bloqueadas y neutralizadas por los anticuerpos, lo que las volvería incapaces de realizar su función de fusionar citotrofosfatos fetales, que juegan un papel clave tanto en el proceso de implantación embrionaria como en desarrollo placentario.El resultado sería un aborto espontáneo del embrión en las mujeres vacunadas, ya que el proceso de diferenciación y anidación en el útero de la madre se previene mediante una inhibición directa de las sincitinas por anticuerpos inducidos por inmunización artificial con cualquiera de las vacunas experimentales COVID-19.

De hecho, esta afirmación está respaldada por la observación de que la expresión de sincitina recombinante en una amplia variedad de tipos de células induce la formación de sincitas gigantes y la fusión de una línea celular trofoblástica humana que expresa sincitina endógena puede inhibirse mediante un antisuero antisintético. . Un anticuerpo policlonal de conejo producido contra una mezcla de péptidos Env-W fue capaz de inhibir la fusión celular in vitro mediada por sincitinas humanas 12.

Con la misma lógica, podríamos esperar que los anticuerpos dirigidos contra el pico también pudieran reconocer cruzadamente y neutralizar la Sincitina 2, y por lo tanto su actividad inmunosupresora podría verse afectada, dejando al embrión expuesto al reconocimiento del sistema inmunológico de la madre, lo que podría conducir al rechazo inmunológico materno del feto 13.

Se ha demostrado que las proteínas de la envoltura de HERV (HERV-Env), por un lado, desencadenan inmunidad tanto innata como adaptativa, provocando reacciones inflamatorias, citotóxicas y apoptóticas. Por otro lado, tienen la capacidad de prevenir la activación de la respuesta inmune, presentando propiedades inmunosupresoras y actuando como inmunorreguladores 14.

Cuando existe una similitud tan alta con los motivos de péptidos retrovirales endógenos, el sistema inmunológico humano puede detectarlo como un antígeno distinto y puede desencadenar una respuesta alérgica, como las que ocurren cuando los haptenos (por ejemplo, la penicilina) se unen a las proteínas del huésped 11.

Con la vacunación contra COVID-19, también se pudieron inducir respuestas de anticuerpos de tipo IgE e hipersensibilidad de tipo retardado por las células T, como se observó en ratones, que después de la exposición a una vacuna contra el SARS, les provocó una respuesta alérgica 15, 16.

Por lo tanto, ya sabemos que debido a la similitud de la proteína pico del virus SARS-CoV-2 con las dos proteínas humanas, Sincitin 1 y Sincitin 2, es poco probable que se obtenga una vacuna COVID-19 segura, sin observar efectos secundarios alérgicos, citotóxicos y / o autoinmunes y sin que estos efectos afecten tarde o temprano el delicado mecanismo de reproducción humana.

En segundo lugar, las vacunas experimentales contra COVID-19 podrían afectar la fertilidad humana porque los niveles de expresión del ácido ribonucleico mensajero (ARNm) de las sincitinas aumentan progresivamente desde el inicio de la concepción, durante el primer trimestre y hasta el final del embarazo 17.

Tanto la fusión como la diferenciación de las células trofoblásticas están asociadas con un aumento concomitante en la expresión de ARNm del gen de sincitina (HERV-W env) y la proteína Sincitina. En términos simples, si la cantidad de proteína o ARNm del gen de sincitina disminuye, se observan defectos en la formación de la placenta, mala diferenciación del trofoblasto y disfunción vascular en la placenta.

Se ha demostrado que los niveles de proteína y de transcripción del gen de la sincitina disminuyen significativamente en las placentas de las mujeres con hipertensión inducida por el embarazo, incluidas las pacientes con preeclampsia e hipertensión gestacional 18.

Clínicamente, se encontró expresión disminuida y localización anormal de Sincitin-1 y Sincitin-2 en la preeclampsia, un trastorno del embarazo caracterizado por defectos en la formación de la placenta, mala diferenciación del trofoblasto y disfunción vascular en la placenta. Esto significa que la expresión alterada del gen de la sincitina y la ubicación celular alterada de su producto proteico pueden contribuir a la etiología de la preeclampsia 19. En otras palabras, la expresión placentaria reducida de sincitina puede contribuir a procesos de fusión celular alterados durante la placentagénesis y función placentaria alterada en los trastornos hipertensivos del embarazo 20.

Por otro lado, la determinación de sincitina-1 en espermatozoides humanos y su receptor ASCT-2 en el ovocito humano sugiere muy probablemente un papel de sincitina-1 en la fusión de espermatozoides y ovocitos durante la fertilización [21]. El receptor ASCT-2, pero no la sincitina-1, se expresa en ovocitos y el nivel de ARNm aumenta con el aumento de la madurez de los ovocitos. Sin embargo, aún no está claro cómo los sincitinas y sus receptores llevan a cabo la fusión de gametos.

Vacunas COVID-19: un experimento de transgénesis humana a gran escala

Las vacunas de ARNm contra COVID-19 de las empresas Moderna, Pfizer / BioNtech y CureVac contienen ARN mensajero de proteína de pico, que se administra recubierto con nanopartículas lipídicas de polietilenglicol para evadir los mecanismos del cuerpo y permitirles ingresar a las células.

Esta plataforma de terapia de ARN modificada es totalmente nueva, es una forma experimental de inoculación de genes extraños en el cuerpo humano que no puede denominarse & # 8220vacunación & # 8221 ya que no implica administrar patógenos atenuados o inactivados como antígenos simples que estimulan la inmunidad. Es la inoculación en el cuerpo humano de variantes de genes sintéticos inyectables, para que puedan penetrar en las células humanas y hacer que produzcan la proteína pico (S) del virus. Esto representa un verdadero experimento de transgénesis, nunca antes realizado en la historia de la humanidad para conferir inmunidad contra enfermedades infecciosas-contagiosas de transmisión humana.

Las empresas de biotecnología están luchando por replicar el hecho de que las vacunas de ARNm no tienen la capacidad de ingresar al núcleo para modificar el ADN. Explican que el ARNm de la vacuna solo codificará la glicoproteína de pico (S) y simplemente la transcribirá al citoplasma celular. Cabe destacar que expertos y asesores de organizaciones sanitarias nacionales e internacionales se abstienen de mencionar el mecanismo regulador epigenético del ARNm. La capacidad de regular directamente la expresión génica es un mecanismo ampliamente reconocido por la biología molecular: el silenciamiento génico mediado por ácidos ribonucleicos, el llamado ARN inhibidor (iRNA) 22.

La Asamblea Nobel del Karolinska Institutet en Estocolmo, Suecia, otorgó el Premio Nobel de Fisiología o Medicina 2006 conjuntamente a los investigadores Andrew Fire (Facultad de Medicina de la Universidad de Stanford, Stanford, California, EE. UU.) Y Craig Mello (Facultad de Medicina de la Universidad de Massachusetts, Worchester). , Massachusetts, EE. UU.) Por su descubrimiento de la interferencia de ARN. Estos científicos demostraron el silenciamiento de genes mediante el uso de ARNi de doble hebra 23.

A través del mecanismo de silenciamiento génico mediado por ARNi, las vacunas de ARNm tienen la capacidad potencial de modificar el ADN humano induciendo o silenciando diferentes genes de nuestro genoma. El ARN de interferencia es un mecanismo fundamental para controlar el flujo de información genética en las células.

En el caso específico de las sincitinas, el uso de inhibidores de ARN (ARNsi y ARNhc), es decir, el uso de oligonucleótidos antisentido específicos del gen de la sincitina, ya ha demostrado que el gen puede ser silenciado y que la inhibición de la expresión de Env-W La proteína conduce a una reducción en la fusión y diferenciación del trofoblasto humano 3.

Mediante experimentos in vivo en animales, se llevaron a cabo pruebas de pérdida de función en el útero de ovejas mediante inyección de oligonucleótidos antisentido el día 8 de gestación. Las inyecciones de estos oligonucleótidos bloquearon la producción de proteína de la envoltura del gen ERV en el trofoectodermo de oveja.

El tratamiento génico específico para silenciar la expresión del gen de la envoltura del ERV en ovejas inhibió la diferenciación de las células trofoblásticas binucleadas gigantes y condujo a la pérdida de la gestación el día 20 en todas las ovejas que recibieron oligonucleótidos antisentido 24.

Cabe señalar que los retrovirus endógenos (ERV) son abundantes en los genomas de los vertebrados y juegan un papel fundamental en la reproducción de los mamíferos, particularmente en la morfogénesis e implantación placentarias, por lo que podría esperarse un resultado similar de la inhibición genética específica de las sincitinas 1 y 2 en humanos y primates 25 y posiblemente de los dos genes env relacionados, sincitina A y sincitina B, en ratones 26.

Los oligonucleótidos antisentido están diseñados para modular la transferencia de información del gen a la proteína, interfiriendo con la función del mRNA o pre-RNA. Para lograr una modulación eficaz de la expresión génica mediante oligonucleótidos antisentido, se utilizan modificaciones de oligonucleótidos que no promueven la degradación de ARNasa-H del ARN diana. Por ejemplo, están diseñados para inhibir específicamente la expresión de ARNm del gen de la envoltura de HERV, de modo que inhiben el empalme y / o la traducción de ARNm mediante un mecanismo de bloqueo estérico, que es independiente de la ARNasa-H. Además de los efectos de estos oligonucleótidos inhibidores a corto plazo, la regulación génica a largo plazo puede lograrse mediante ARN antisentido expresado intracelularmente administrado por vectores virales 27.

Conociendo la alta homología que existe entre la sincitina y la proteína pico del virus SARS-CoV-2, y sabiendo que las secuencias de oligonucleótidos que silencian el gen de la sincitina humana tienen un 100% de homología con las secuencias del gen pico introducido en las vacunas, no se puede garantizar que las inyecciones de ARNm contenidas en las vacunas no acabarán afectando la expresión de los genes humanos endógenos Syncytin-1 y Syncytin-2.

Estos aspectos de seguridad y efectos adversos de las vacunas VID-19 sobre la fertilidad humana no están siendo evaluados en los ensayos preclínicos con animales, ni en los ensayos clínicos de fase I, II y III que ya se están realizando con voluntarios que no están debidamente informados de todos los riesgos que conlleva la vacunación 28.

Es importante señalar que hay autores que señalan que los genes de sincitina están presentes en humanos y primates del Viejo Mundo y difieren de los genes Env que están presentes en roedores 17, 25. En este sentido, los ensayos preclínicos de una de las vacunas candidatas de ARNm se realizaron solo en ratones y hámsteres y se publicaron en línea a finales de octubre de 2020 sin revisión por pares 29 después de haber comenzado los ensayos clínicos de fase I y II con voluntarios.

Además, las cláusulas de confidencialidad otorgadas por los gobiernos a las empresas que desarrollan estas vacunas no nos permitirán saber si los constructos que componen las vacunas vectorizadas codifican un gen de pico de SARS-CoV-2 y / o un gen de pico simple o doble. ARNi de cadena con resistencia a nucleasas. Por lo tanto, tampoco podemos saber con certeza si las vacunas que introducen ARN modificados tienen función de ARNi y si pueden apuntar a sitios específicos a lo largo de la transcripción del ARN de un gen, en este caso, las sincitinas humanas, debido a la alta similitud que comparten en la secuencia.

Por todos estos motivos, el resultado de la inoculación de estas vacunas experimentales puede acabar conduciendo a la producción de anticuerpos & # 8220 con un 95% de eficacia & # 8221 pero no se puede descartar que, como efecto secundario, puedan bloquear la traducción de un ARN mensajero que codifica una proteína humana normal. Sabemos de antemano que los oligonucleótidos antisentido resistentes a la ARNasa H proporcionan una resistencia completa a las nucleasas, exhiben una buena capacidad de direccionamiento, una alta eficiencia en la célula y tienen especificidad de secuencia 30.

Con las herramientas de biología molecular disponibles en la actualidad, las empresas de biotecnología pueden introducir modificaciones desestabilizadoras en los ARNm, pueden mejorar la eficacia de los ARN inhibidores y, por lo tanto, pueden activar un mecanismo alternativo a través del cual se elimina la hebra detectada, lo que otorga al ARNi una potente actividad silenciadora. Si estos ARN modificados se administran con las vacunas VID-19, la población mundial estará sujeta a un método nuevo y pasado por alto de terapia génica experimental a gran escala, destinado a desestabilizar la expresión de genes humanos mediante la inyección de secuencias extrañas, con posible resistencia a nucleasas y capacidad probada para ejercer control epigénico.

Las empresas que desarrollan estas vacunas no están actuando de forma ética ni responsable, porque no están realizando estudios de seguridad en los modelos animales adecuados, ni están respetando los plazos necesarios para observar efectos adversos graves a medio y largo plazo, ni están proporcionando los necesarios. información que consideran & # 8220 confidencial & # 8221. Al evitar e improvisar las fases de prueba preclínica y pasar directamente a las fases de prueba clínica I, II y III, las empresas están trasladando el riesgo de los animales a los humanos, utilizando a las personas como modelos de desafío animal.

En definitiva, nos vemos obligados a denunciar que si los gobiernos quieren implementar una vacunación experimental masiva y obligatoria de la población con vacunas que no han cumplido las fases experimentales y que están aprobadas con protocolos de & # 8220emergencia & # 8221, están siendo cómplices de posibles crímenes de lesa humanidad, porque estas & # 8216novelas & # 8217 plataformas terapéuticas tienen los mecanismos más ampliamente aceptados de silenciamiento de genes inhibidores inducidos por ARN implícita e invisiblemente en sus diseños, cuyos efectos son bien conocidos por la comunidad científica internacional y, sin embargo, se están minimizando. por las empresas farmacéuticas, cuando deben ser evaluadas antes de que estas vacunas sean comercialmente autorizadas.

Las consecuencias de inocular estos genes extraños en la población con las vacunas VID-19 podrían ser catastróficas para el destino de la humanidad, si consideramos el papel de las proteínas de la envoltura de HERV (sincitinas) en la fisiología humana y sus posibles efectos patogénicos en varios tipos de cánceres. y trastornos autoinmunitarios tales como esclerosis múltiple 31, 32, esclerosis lateral amiotrófica 33, 34, 35 y diabetes tipo 1 36.


Respuestas inmunes a los retrovirus

Los retrovirus son invasores del genoma que han compartido una larga historia de coevolución con los vertebrados y su sistema inmunológico. Encontrados endógenamente en genomas como rastros de invasiones pasadas, los retrovirus también son amenazas considerables para la salud humana cuando existen como virus exógenos como el VIH. La respuesta inmune a los retrovirus se activa mediante sensores de inmunidad innata codificados en la línea germinal que reconocen los componentes virales y el daño inducido por la infección. Esta respuesta se desarrolla con la inducción de efectores antivirales y el lanzamiento de la respuesta inmune adaptativa clonal, que puede contribuir a la inmunidad protectora. Sin embargo, los retrovirus evaden eficazmente la respuesta inmunitaria debido a su rápida evolución. La falta de respuesta de las células inmunitarias especializadas, una forma de negligencia, también puede contribuir a respuestas inmunes antirretrovirales inadecuadas. Aquí, discutimos los mecanismos por los cuales las respuestas inmunes a los retrovirus se montan a nivel molecular, celular y orgánico. También discutimos cómo la inmunidad intrínseca, innata y adaptativa puede cooperar o entrar en conflicto durante la generación de respuestas inmunes.


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Discusión

Presentamos aquí un análisis comparativo de las tasas evolutivas y las limitaciones selectivas del VIH-1 y el PTLV. Aunque ambos patógenos tienen muchas características retrovirales en común, su dinámica evolutiva muestra diferencias notables. Utilizando un enfoque de escaneo, hemos proporcionado tasas evolutivas sistemáticas en todo el genoma del VIH-1 y el PTLV. El rango de las estimaciones de la tasa evolutiva y la variabilidad a través del genoma son cuantitativamente similares a estudios previos basados ​​en genes únicos o múltiples (Korber et al. 1997 Salemi et al. 2001). Cabe señalar que el grado de variabilidad de la tasa en el análisis de ventana deslizante depende del tamaño de la ventana. Por ejemplo, los tamaños de ventana más pequeños pueden revelar diferencias más sutiles en la tasa de evolución, pero esto también puede resultar en una pérdida de la distinción temporal entre las secuencias. El VIH, con una tasa de sustitución de nucleótidos que varía de 4,27 × 10 −4 a 2,71 × 10 −3 sustituciones / sitio / año, tiene uno de los genomas de evolución más rápida (Wain-Hobson 1993). Este lentivirus debe su potencial evolutivo a una combinación de una alta tasa de mutación (Mansky y Temin 1995 Gao et al. 2004), un tiempo de generación corto (Ho et al. 1995 Wei et al. 1995) y un gran número de células infectadas. (Buckley et al. 2001). Con un rango de 2,64 × 10 −7 a 6,64 × 10 −7 sustituciones / sitio / año, las tasas de evolución de PTLV son varios órdenes de magnitud más bajas que el VIH-1. El PTLV también está sujeto a una selección de purificación más fuerte que el VIH. Aproximadamente el 10% de los sitios en el genoma del VIH parecen estar seleccionados positivamente, de acuerdo con los hallazgos de una evolución adaptativa generalizada en el genoma del VIH-1 (Yang, Bielawski y Yang 2003). No se infirió ninguna clase de sitios seleccionados positivamente para el genoma completo de PTLV.

La relación entre Dnorte/DS y la tasa de evolución que demostramos es la esperada. Sin embargo, constituye la base para más análisis comparativos entre el VIH-1 y el PTLV. Extrapolando esta relación, las tasas de evolución del VIH-1 y el VPTL son aproximadamente 3 logaritmos diferentes, independientemente de la Dnorte/DS relación (fig. 4). Se obtuvo una conclusión similar al comparar las tasas de sustitución de sinónimos. Por lo tanto, las diferentes restricciones selectivas no proporcionan una explicación adecuada de las diferencias observadas en la tasa de evolución. En cambio, lo más probable es que la razón deba buscarse en el proceso subyacente por el cual se genera la variación genética. Las diferencias en la tasa de mutación entre el VIH (3,5 × 10 −5 por base por ciclo) y el HTLV (7 × 10 −6 por base por ciclo) también son insuficientes para explicar la enorme diferencia en la tasa de sustitución (Mansky y Temin 1995 Mansky 2000). Se ha argumentado que el número de ciclos de replicación sucesivos es probablemente más importante que la tasa de mutación para establecer la variación genética viral (Coffin 1990). Sin embargo, HTLV mantiene altas cargas provirales mientras permanece genéticamente estable (Wattel et al. 1992 Albrecht et al. 1998 Gabet et al. 2000). Esta discrepancia se ha resuelto mediante el hallazgo de expansión clonal de las células infectadas (Wattel et al. 1995). La replicación de provirus asociados a células hace uso de una ADN polimerasa con capacidad de corrección de pruebas y genera solo una variación genética limitada. Se ha sugerido mediante un modelo de mono ardilla que la infección por HTLV-1 se caracteriza por una fase transitoria de transcripción inversa seguida de la multiplicación persistente de células infectadas (Mortreux et al. 2001). Sin embargo, la contribución exacta de la replicación a través de la transcripción inversa aún no se ha dilucidado. Hallazgos recientes sugieren un papel importante para la replicación persistente del virión en el mantenimiento de cargas provirales elevadas, y otros factores limitan la diversidad genética del HTLV (Taylor et al. 1999 Wodarz y Bangham 2000 Overbaugh y Bangham 2001). Por ejemplo, es probable que las células que comienzan a expresar la proteína transactivadora T ax después de la infección mueran por una respuesta de linfocitos T citotóxicos (CTL) específicos de T ax antes de completar el ciclo de replicación viral (Bangham 2000 Hanon et al. 2000). Dichos mecanismos no son restricciones selectivas en un sentido evolutivo porque actúan independientemente del fenotipo de las variantes recién generadas (excepto si se tratara de mutantes de escape de CTL específicos en impuestos). Por lo tanto, nuestro análisis utilizando Dnorte/DS ratios no es capaz de distinguir entre tales limitaciones y la expansión clonal predominante. La diferencia en la selección natural entre el VIH-1 y el PTLV probablemente se deba a un impacto diferente del sistema inmunológico del huésped. Es bien sabido que el VIH corrige con éxito mutaciones para evadir las respuestas inmunes (generadas por anticuerpos neutralizantes, células T auxiliares y CTL). El HTLV es capaz de transformar células y se propaga a través del contacto de célula a célula, lo que sugiere una exposición limitada a la presión de selección ejercida por los anticuerpos (Bangham 2003). Sin embargo, el HTLV se transcribe de forma persistente y hay una fuerte respuesta CTL al HTLV-1 con tax como el antígeno diana dominante (Kannagi et al. 1991). Niewiesk y col. (1995) demostraron que la selección de CTL favoreció la aparición de secuencias variantes de T ax. Estos últimos, sin embargo, parecían defectuosos en su actividad transactivante (Niewiesk et al. 1995). Esto sugiere que las limitaciones funcionales y, por tanto, la purificación de la selección, podrían no permitir un escape inmunológico significativo. Sin embargo, es necesario investigar más a fondo el escape inmune de la infección por HTLV.

Somos conscientes de que este análisis compara poblaciones virales con una historia epidemiológica y demográfica distinta. El grupo M del VIH-1 se originó a través de una transmisión cruzada entre especies relativamente reciente del virus de la inmunodeficiencia de los simios de chimpancés a humanos (Gao et al. 1999 Korber et al. 2000 Salemi et al. 2001), lo que resultó en una propagación explosiva en la población humana. Los virus PTLV han cruzado con frecuencia la barrera de especies entre humanos y simios (Vandamme, Salemi y Desmyter 1998), y las cepas contemporáneas son el resultado de la evolución durante un período de tiempo considerablemente más largo (Salemi, Desmyter y Vandamme 2000 Van Dooren, Salemi, y Vandamme 2001). Debido a la estabilidad genética del HTLV, hemos optado por analizar un conjunto de datos completo que incluye HTLV-1, HTLV-2 y secuencias intercaladas del virus linfotrópico de células T de simios (STLV). La información antropológica proporcionó una fecha de calibración para un nodo en la filogenia (Yanagihara et al. 1995 Salemi, Desmyter y Vandamme 2000). Las secuencias de VIH muestreadas en diferentes momentos suelen tener una acumulación estadísticamente significativa de diferencias genéticas a lo largo del tiempo, lo que permite estimar la tasa de evolución molecular (Drummond et al. 2003). Los conjuntos de fechas PTLV y HIV-1 inevitablemente representan escalas de evolución muy diferentes. Mientras que el tiempo hasta el ancestro común más reciente (TMRCA) es de alrededor de 70 años para el grupo M del VIH-1 (Korber et al. 2000), el TMRCA para la filogenia del PTLV es aproximadamente 4 órdenes de magnitud mayor (Salemi 2000). Por lo tanto, también intentamos analizar un subconjunto de HTLV-1 excluyendo todas las cepas de simios. Sin embargo, las estimaciones del reloj molecular no fueron lo suficientemente potentes para correlacionarse con Dnorte/DS estimaciones (datos no mostrados). Cruzar la barrera de las especies también podría haber tenido su influencia en los parámetros evolutivos que hemos inferido para el PTLV. Sin embargo, a la luz de hallazgos recientes, parece plausible que el efecto de diferentes hospedadores en la evolución del virus sea más sutil que las diferencias que observamos entre PTLV y VIH-1. Gabet, Gessain y Wattel (2003) han demostrado que, al igual que para HTLV-1, STLV-1 combina cargas provirales extremadamente altas con estabilidad genética entre animales e intra animales. Además, la misma combinación paradójica para este oncovirus simio también podría explicarse por la demostración de expansión clonal in vivo (Gabet, Gessain y Wattel 2003).

El enfoque de la ventana deslizante estimó los parámetros evolutivos bajo una topología de árbol único. Sin embargo, la recombinación frecuente podría resultar en diferentes filogenias a lo largo del genoma del VIH-1. Además, debido a la superposición de datos en los análisis de ventanas deslizantes, las ventanas no pueden considerarse completamente independientes y podríamos tener demasiada confianza en la relación entre la tasa de evolución y Dnorte/DS. Para abordar esto, también estimamos las tasas evolutivas utilizando un método coalescente bayesiano que permite comparar historias evolutivas vinculadas o no vinculadas entre particiones no superpuestas del genoma del VIH-1. Aunque el modelo discreto de historias evolutivas no vinculadas no se adaptará completamente a la recombinación, al menos se espera que nuestra comparación indique un posible sesgo de asumir una única historia evolutiva. Al igual que en el análisis de la ventana deslizante, estas tasas también se correlacionaron significativamente con la Dnorte/DS valores. Por lo tanto, para el VIH-1, esta relación parece ser sólida para algunos de los supuestos de nuestro modelo estadístico. Curiosamente, la fecha para el MRCA del grupo M del VIH-1 (1929, CI: 1920-1938) está en perfecto acuerdo con estimaciones previas (Korber et al. 2000 Salemi et al. 2001) y, considerando los IC, esta estimación es solo marginalmente anterior que los MRCA para los loci individuales (tabla 2). Estudios de simulaciones anteriores han sugerido que asumir una única historia evolutiva resultará en una sobreestimación del tiempo hasta el MRCA cuando la recombinación ha moldeado significativamente los datos de la secuencia (Schierup y Forsberg 2001 Worobey 2001). Nuestros hallazgos sugieren que este efecto de la recombinación puede ser notable al estimar las tasas y fechas de las secuencias del VIH, pero podría ser menos grave de lo esperado. Una discusión completa de las estimaciones bajo el modelo no vinculado en comparación con los resultados de la simulación está disponible en otra parte (Lemey et al. 2004). En conclusión, nuestro enfoque de exploración puede revelar la relación entre la presión selectiva y la tasa evolutiva, lo que proporciona información útil sobre la dinámica evolutiva de las poblaciones virales.


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